爱华网鸡大肠杆菌病是一种常见细菌性传染病，主要发生在雏鸡和成年产蛋鸡开产阶段，其防治手段主要是使用抗菌药和抗生素，但长期使用化学药物会导致细菌耐药性、药物毒副作用、药物残留所致的畜产品安全等问题。此外，畜产品无公害化生产的要求，使抗生素的选择范围越来越小。而中药治疗效果受菌株耐药性的影响较小，毒性小，副作用小、几乎无残留[1]，因此研究使用中药防治鸡大肠杆菌病有重要的现实意义。 板蓝根为十字花科植物菘蓝的根，具有清热解毒、凉血利咽、抗菌、抗病毒、增强免疫及抗内毒素等作用；野菊花为菊科多年生草本植物野菊的头状花序，具有清热解毒的作用；金银花为忍冬科植物忍冬的花蕾，具有清热解毒，疏散风热，凉血止痢，降血降火，消咽利膈之功效；甘草双子叶植物豆科胀果甘草或光果甘草的根及根茎，具有抗炎、抗病毒，和保肝解毒及增强免疫功能等作用。但有关板蓝根、野菊花、金银花和甘草对鸡大肠杆菌抗菌作用的报道较少，对复方研究几乎没有，这与中药应用的客观现象不符合，中药应用绝大部分都是复方，因此加强中药复方抗菌活性的研究对于中药资源的开发、利用具有重要的意义。本试验以单味板蓝根及其笔者自拟组方进行体外抑菌效果研究，为中药复方的应用提供一定的理论基础。 1 材料与方法 材料：板蓝根、金银花、野菊花、甘草（购于南宁市药材站）；蛋白胨、营养琼脂、牛肉浸膏、氯化钠、雏鸡（7日龄）、大肠杆菌菌株（临床分离株Ecoli.01）。 方法：药液的制备。 板蓝根提取液的制备。取板蓝根100g，加1000ml的蒸馏水水煎（第一次1.5小时，第二次1小时），合并两次板蓝根水煎液，然后将板蓝根水煎液浓缩至药液浓度1g/ml，真空抽滤得滤液。 野菊花提取液的制备。 取野菊花100g，加50%乙醇（无水分析纯配制）浸泡12小时，80℃水浴热浸提4小时，滤去残渣，滤液用文火浓缩至100ml（即1ml相当于1g），调节PH值至7.0,备用。 金银花提取液的制备。取金银花100g，破碎后置于磨口圆底烧瓶中，加70%乙醇（无水分析纯配制）热回流浸提，用调温电热套加热至微沸状态，热回流2次（第一次1小时，第二次0.5小时），得浸提液备用。 甘草提取液的制备。称取甘草粉末100g，加入蒸馏水1000ml在沸水浴中提取3次，滤去甘草渣，合并提取液，离心得上清液，减压浓缩至100ml，真空抽滤得滤液备用。 大肠杆菌菌液制备与浓度测定。菌种复壮后，采用平皿表面活菌计数法确定菌液浓度，使细菌原液浓度达9亿个/ml。 复合提取液的配制。按照正交设计法确定各提取液组合的浓度，将上述4种提取液按表1的方案分别进行组合，灭菌，备用。
抑菌试验。采用琼脂打洞扩散法。分别挑取菌落于无菌生理盐水中混匀，配制成106个/ml菌悬液（比浊法配制）。吸取1:50的稀释菌液1ml注入直径为9cm的灭菌培养皿中，每个菌种加入1个培养皿，随后注入45℃～50℃的灭菌营养琼脂20ml，立即充分旋转混匀，待琼脂凝固后，用外径为6mm的打孔器在培养基上打孔，再用灭菌滴管吸取融化的无菌营养琼脂液，每孔滴入1～2滴，作补孔用，以免底部漏液。用微量加样器各加入50ul药液，同时作空白对照。36℃恒温培养16小时～18小时，每个菌种做3个平行样本，以3次平均值为抑菌圈直径；判断各种药液对大肠杆菌的抑菌效果。抑菌圈直径＞20mm为极敏。抑菌圈直径15～20mm为高敏，抑菌圈直径10～15为中敏，抑菌圈直径＜10为低敏，无抑菌圈为不敏感[2]。 2 结果与分析 四种中药对大肠杆菌的体外抑菌试验。由表2可知，板蓝根、金银花、野菊花、甘草对大肠杆菌都有明显的抑菌作用，但三者之间无显著差异；相对其它三种中药板蓝根对大肠杆菌的体外抑菌较敏感。复合提取液对大肠杆菌的体外抑菌试验。 由表3可知野菊花提取液浓度对抑菌圈直径的影响最大，其次为板蓝根，再次金银花；复合提取液抑菌效果最佳的浓度配比为板蓝根1.0g/ml、金银花1.0g/ml、野菊花2.0g/ml，甘草0.5g/ml。甘草对细菌的影响较小，其主要作用在于协调相互间的作用，从中药君、臣、佐、使的投药习惯考虑也可选择复合提取液浓度配比为板蓝根1.0g/ml、金银花1.0g/ml、野菊花2.0g/ml，甘草1.0g/ml。 3 结论与讨论 不同单味药对大肠杆菌的抑菌作用存在差异。试验中四种药物体外抑菌试验中发现板蓝根、金银花、野菊花和甘草均具有较强的抑菌效果，但三者之间无显著差异。 不同组方对大肠杆菌的体外抑菌作用存在差异。不同组方由4种单味药进行组方，结果不同组方对大肠杆菌的抑菌作用有差异，综合从开发复合制剂效果、生产成本及传统用药习惯等角度考虑，建议以板蓝根：金银花：野菊花：甘草为1.0g/ml：1.0g/ml：2.0g/ml：1.0g/ml作为指导用药方案。
