白细胞介素-1,简称白介素1 (IL-1),是一种细胞因子,属于白细胞介素的一种。它是由活化的巨噬细胞所产生,能够刺激参与免疫反应的细胞增殖、分化并提高其功能。
白介素1_白介素1 -概述
白细胞介素-1,简称白介素1(IL-1),是一种细胞因子,属于白细胞介素的一种。白细胞介素(interleukin,IL),简称白介素,是指在白细胞或免疫细胞间相互作用的淋巴因子。白细胞介素在传递信息,激活与调节免疫细胞,介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。
细胞分泌白介素等细胞因子
白介素1_白介素1 -名称
中文名称:白介素1
英文名称:interleukin-1;缩写 IL-1
其它名称:淋巴细胞刺激因子
白介素1_白介素1 -结构
白介素1(IL-1)是一种多肽,分子质量为17ku,有 IL-1a 及 IL-1β 两种亚型。IL-1a由159个氨基酸组成;IL-1β含153个氨基酸;两者由不同的基因分别编码。虽其氨基酸顺序仅有26%的同源性,然而IL-1a和IL-1β以同样的亲和力结合于相同的细胞表面受体,发挥相同的生物学作用。
IL-1受体(IL-1r)IL-1r几乎存在于所有有核细胞表面,每个细胞的IL-1r数目不等,少则几十个(如t细胞),多则数千个(如成纤维细胞)。IL-1r主要有两种类型:一种为IL-1r1,其分子伸入胞浆内的肽链部分较长,起着传
递活化信号的作用;另一种为IL-1r2,胞内部分的肽段较短,不能有效地传递信号,而是将胞外部分的肽链释放到细胞外液中,以游离形式与IL-1结合,发挥反馈抑制作用。gm-csf、g-csf及IL-1自身均可提高细胞IL-1r的表达水平,而tgf及皮质类固醇能降低IL-1r的表达。
白介素1_白介素1 -来源
白介素1 (IL-1)由活化的巨噬细胞所产生
白介素1(IL-1)是由活化的巨噬细胞所产生,此外几乎所有的有核细胞,如b细胞、nk细胞、体外培养的t细胞、角质细胞、树突状细胞、星形细胞、成纤维细胞、中性粒细胞、内
皮细胞以及平滑肌细胞均可产生IL-1。正常情况下只有皮肤、汗液和尿液中含有一定量的IL-1,绝大多数细胞在受到外来抗原或丝裂原刺激后才能合成和分泌IL-1。
白介素1_白介素1 -生物特性
白介素1(IL-1)有以下生物特性:
1、活化T细胞,刺激B细胞增殖,活化中性粒细胞;
2、诱导内皮促凝血活性,诱导内皮表面抗原;
白介素-1β 诱导内皮促凝血活性
3、促进成纤维细胞有丝分裂;
4、促进细胞在软琼脂中生长;
5、活化破骨细胞,抑制胶原合成,刺激胶原分解;
白介素1对破骨细胞和胶原酶的作用
6、促进星形细胞分裂。
白介素1_白介素1 -功能与作用
1、局部低浓度的IL-1主要发挥免疫调节作用
① 与抗原协同作用,可使cd4+t细胞活化,il-2r表达;
② 促进b细胞生长和分化,可使脾细胞的溶血空斑数(pfc)增加100倍,这说明IL-1也促进抗体的形成;
③ 促进单核-巨噬细胞等apc的抗原递呈能力;
内热源包括白介素1
④ 与il-2或干扰素协同可以增强nk细胞活性;
⑤ 吸引中性粒细胞,引起炎症介质释放;
⑥ 可刺激多种不同的间质细胞释放蛋白分解酶并产生一些效应;例如类风湿关节炎的滑膜病变(胶原破坏、骨质重吸收等)就是由于关节囊内mφ受刺激后活化并分泌IL-1,使局部组织间质细胞分泌大量的前列腺素和胶原酶,分解坏滑膜所致;
⑦ IL-1对软骨细胞、成纤维细胞和骨代谢也均有一定影响。
2、IL-1的大量分泌或注射可以通过血循环引起全身反应
① 作用于下丘脑可引起发热,具有较强的致热作用。这种作用与细菌内素明显不同:IL-1致热曲线为单向、潜伏期200min左右,而内毒素致热曲线为双向,潜伏期至少为1h;IL-1对热敏感、易破坏,而内毒素耐热;给家兔反复注射内毒素可出现耐受,但对IL-1不会耐受。
内热源包括白介素1
② 刺激下丘脑释放促肾上腺皮质素释放激素,使垂体释放促肾上腺素,促进肾上腺素释放糖皮质激素,对IL-1有反馈调节作用。
③ 作用于肝细胞使其摄取氨基酸的能力增强,进而合成和分泌大量急性期蛋白,如α2球蛋白、纤维蛋白原、c-反应蛋白等。
④ 使骨髓细胞库的中性粒细胞释放到血液,并使之活化;增强其杀伤病原微生物的能力和游走能力。
⑤ 与csf协同可促进骨髓造血祖细胞增殖能力,使之形成巨大的集落;还可诱导骨髓基质细胞产生多种csf并表达相应受体,从而促使造血细胞定向分化。IL-1虽未广泛用于人体研究,但其对免疫系统的特殊作用使它在临床应用方面具有诱人的前景。
白介素1_白介素1 -临床研究
1、白介素-1β刺激人眼球后成纤维细胞表达和分泌RANTES的实验研究
1.IL一1β可以激活即使其大量表达并合成趋化因子RANTES,这可能是GO眶内组织中淋巴细胞浸润的主要原因之一。
2.IL一1β刺激RF合成的RANTES,具有明显的生物学活性,对PBL有较强的趋化作用,因此,RANTES可能是GO中引起淋巴细胞浸润眶内组织的主要因子。
3.IL一1β诱导RF合成RANTES的作用,可能是通过活化转录因子NF一出所致。
2、白介素-1调节牙周膜细胞参与骨吸收的研究进展
白介素-1(interleukin-1,IL-1)是强大的骨吸收刺激因子,在牙周病和正畸牙移动过程中发挥重要作用,具有许多成骨细胞特点的牙周膜细胞是IL-1重要的靶细胞之一,牙槽骨改建受IL-1的调节和影响,笔者就IL-1调节牙周膜细胞参与骨吸收活动的相关机制作一综述。
3、白介素1受体拮抗剂基因转染髁突软骨细胞的作用
研究:经人白介素1受体拮抗剂(hIL-1ra)基因转染后的人颞颌关节髁突软骨细胞对IL-1作用的影响。
结论:转染细胞hIL-1ra基因的表达对于IL-1作用存在拮抗和抑制作用。
4、小鼠白介素1受体拮抗剂重组蛋白的制备及其预防化疗骨髓毒副作用的研究
探讨白介素1受体拮抗剂(interleukin1receptorantagonist,IL-1Ra)在小鼠骨髓造血系统中的作用及机制,并且对其进行了预防化疗导致的骨髓抑制的临床前研究。综合研究结果得出结论:应用rMuIL-1Ra蛋白可以促进化疗
引起的小鼠骨髓损伤的恢复;在5-Fu化疗之前的预防性应用和之后的治疗性应用rMuIL-1Ra蛋白都可以促进骨髓的恢复、显著加快外周血血小板的恢复还大幅度的提高大剂量化疗下小鼠的存活率。人和小鼠的IL-1Ra蛋白有高达78%的同源性,而且功能相似。
5、介导白介素-1炎症反应的信号激酶作用机制
1、IRAK-1、IRAK-2与PI3-激酶都能调控IL-1诱导的NF-〓和AP-1活化。
2、IRAK-1和IRAK-2共同调控IL-1诱导的NF-〓和AP-1活化。
3、IRAK-2和PI3-激酶共同调控IL-1诱导的NF-〓活化。
4、IRAK-1和PI3-激酶共同调控IL-1诱导的NF-〓活化。
5、IRAK-1、IRAK-2与PI3-激酶共同调控IL-1诱导的NF-〓活化。
6、PI3-激酶可独立调控IL-1诱导的AP-1活化,也可与IRAK-1或/和IRAK-2一起调控AP-1活化。
7、反义IRAK-2ODN抑制IL-1的生物学效应,可作为一种潜在的抗炎策略。
白介素1_白介素1 -生产与应用
1、人白介素1α(IL-1α )ELISA试剂盒
规格:48T/96T
人白介素-1α
实验原理:
用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗IL-9抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IL-9抗体、HRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB
在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-9呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
操作步骤:
1.标准品稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul
,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为1200ng/L,800ng/L,400ng/L,,200ng/L,100ng/L)。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
人白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒产品用途:本试剂盒仅作科研ELISA检测用,不用做临床。
2、人白介素1β (IL-1β)ELISA试剂盒
ELISAkit用途:仅限科研实验
人白介素1β (IL-1β)ELISA试剂盒
ELISAkit应用:被测样品的定性定量分析
规格:96T/48T(盒装)
ELISA试剂盒保存条件:2-8℃低温避光保存
ELISA试剂盒库存:现货供应、厂家低价直销
注意事项
1.血清标本如是以无菌操作分离,则可以在2~8℃下保存一周,如为有菌操作,则建议冰冻保存。样本的长时间保存,应在-70℃以下。
2.在使用微量加样器时,吸取不同瓶子中液体后要更换枪头,即使吸取标准品溶液。
3.吸取液体时速度不易太快,以免产生气泡,吸取的量不够准确。
4.样本的采集及血清分离中要注意尽量避免细菌污染,一则细菌的生长,其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用;二则一些细菌的内源性酶,如大肠杆菌的β-半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。1.5吸取液体时要选用量程和需要量接近的微量加样器吸,减少误差。
5.液体全部加入酶标孔后,最好将酶标板放在桌子上平行轻轻摇晃30s,使液体充分混合均匀,也使其得到充分的反应。
6.孵育时要使盖板膜封好酶标板,防止水分蒸发,以防曲线不成线性。
7.实验前30min将试剂盒中的所有试剂从冰箱取出,使试剂盒中的所有试剂与提取好的样品溶液的温度相同,酶标板只要取出所需量。
8.由于底物显色剂对光及其敏感,因此要避光保存。
要注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团,其有类似过氧化物的活性,因此,在以HRP为标记酶的ELISA测定中,如血清标本中血红蛋白浓度较高,则其就很容易在温育过程中吸附于固相,从而与后面加入的HRP底物反应显色
9.手工洗板时每次加入洗涤液后。应静置15~30s,不要将一个酶标孑L中的洗涤液溅入另一酶标孔中,防止交叉污染。甩去洗涤液后将酶标板放在毛巾或吸水纸上拍干。
10.检测吸光度前应将酶标仪打开,将其预热30min以上。
11.底物为TMB,避免与皮肤相接触。终止液为2tool的浓硫酸具有腐蚀性,应尽量避免接触皮肤。
12.孵育的时间应该严格按照试剂盒说明书上的时间为准。
13.要尽量做双孔实验,这样才既能保证数据的准确性,又能反映出试剂盒的精密度。
14.冰冻保存的血清标本须注意避免因停电等造成的反复冻融。标本的反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用,从而引起假阴性结果。此外,冻融标本的混匀亦应注意,不要进行剧烈振荡,反复颠倒混匀即可。
15.对样本的结果有疑问时需要使用其他检测方法进行验证。
16.没有去离子水或双蒸水时,可以使用娃哈哈纯净水配制溶液,切勿使用自来水。
17.标本在保存中如出现细菌污染所致的混浊或絮状物时,应离心沉淀后取上清检测。
3、绵羊白介素1β ELISA试剂盒.
绵羊白介素1β ELISA试剂盒
ELISAkit用途:仅限科研实验
ELISAkit应用:被测样品的定性定量分析
规格:96T/48T(盒装)
试剂盒保存条件:2-8℃低温避光保存
ELISA试剂盒库存:现货供应、厂家低价直销
ELISA的基本原理有三条:
(1)抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫学活性;
(2)抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物,而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性;
(3)酶结合物与相应抗原或抗体结合后,可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在,而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的,因此,可以按底物显色的程度显示试验结果。
Elisa试剂盒测定技术的发展
临床测定技术的发展主要在于方法学的发展,而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。目前,分子生物学正在并最终肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而彻底的认识,其对免疫测定技术发展的
影响也是直接而又有效的.
Elisa试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗体ELISA检测
ELISA常用的四种方法
1.直接法测定抗原
将抗原吸附在载体表面;
加酶标抗体,形成抗原―抗体复合物;
加底物。底物的降解量=抗原量。
2.间接法测定抗体
将抗原吸附于固相载体表面;
加抗体,形成抗原-抗体复合物;
加酶标抗体;
加底物。测定底物的降解量=抗体量。
3.双抗体夹心法测定抗原
将抗原免疫第一种动物获得的抗体吸附于固相表面;
加抗原,形成抗原-抗体复合物;
加抗原免疫第二种动物获得的抗体,形成抗体抗原抗体复合物;
加酶标抗抗体(第二种动物抗体的抗体);
加底物。底物的降解量=抗原量。
4.竞争法测定抗原
将抗体吸附在固相载体表面;
(1)加入酶标抗原;
(2)加入酶标抗原和待测抗原;
(3)加底物。对照孔与样品孔底物降解量的差=未知抗原量。