内参基因_飞轻非重 qpcr内参基因加样顺序
这两天就趴在这个内参上面了。内参基因是指定量检测某个基因表达变化的时候同时检测一个内参基因的表达作为一个参照,以排除实验过程中由于操作误差影响结果。 以前只知道内参有GAPDH,b-actin,18S。其实不然,这只是最常用的。还有较常用的,EF1a, SAMD, L23, UK, PP2A, APR, UBI3, SAND, ACT, TUB, GBP, F-BOX,PPRandTIP41等,这些都是可以的。根据具体的实验要求而定,像现在做miRNA用U6做内参,非编码RNA嘛,U1等也是可以的。(U6的信息,NCBI里那么多,我这新手真的是不懂啊,为了这个我找了好久,RNU6-1RNA, U6 small nuclear 1 [ Homo sapiens ] 106Gene ID: 26827 , updated on 7-Jun-2010)。 现在研究内参基因的文章比较多,现在才明白内参并不是万能的,通用的,也是需要选择和检测的,不同的内参在不同的实验条件下会有变化,所以要选择在某个特定实验中特定的稳定的内参,虽然我做实验也是用b-actin。 好的内参需要满足以下条件,:1, 不存在假基因(Pseudogene),以避免基因DNA的扩增; 2,高度或中度表达,排除低表达;3,稳定表达于不同类型的细胞和组织(如正常细胞和癌细胞),而且其表达量是近似的,无显着性差别;4,表达水平与细胞周期以及细胞是否活化无关;5, 其稳定的表达水平与目标基因相似;6,不受任何内源性或外源性因素的影响,如不受任何实验处理措施的影响。
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