目录
一、昆虫标本的采集.
1、采集昆虫的工具.
2、采集昆虫的方法
3、采集昆虫的时间
二、干制昆虫标本的制作
1、制作昆虫标本的工具
2、干制标本制作法
三、幼虫标本的保存
1、浸制法
2、干吹幼虫标本制作法
四、昆虫生活史纸盒标本制作
五、蝶、蛾贴翅标本制作
六、昆虫玻片标本的制作
1、制片的一般方法
2、几种昆虫的制片法
七、昆虫标本的鉴定
1、意义
2、步骤
一、昆虫标本的采集
研究昆虫学,要想得到大量理想的研究材料,就必须依靠采集。采集昆虫标本是研究昆虫学最基础的工作,是初学昆虫者必须掌握的专门技术。采集昆虫标本要注意以下几点:
(1)全面采集:各种昆虫的栖息场所,危害寄主的种类以及寄主被害的部位都不相同,有的飞翔迅速,跳跃敏捷,有的身体柔弱,容易破裂或死亡,有的身体微小,不易看见,有的呈特别的保护色等等,采集时必须全面注意。同时,同种的雌雄成、幼虫都是研究时重要的材料,不应随便舍弃。就是相同的个体,也需要多一些比较的标本,或供解剖交换之用。此外,全面采集也意味着经常的和有计划的采集,这也是很重要的。
(2)标本完整:要想得到完整的标本,必须注意采集、毒杀、包装保存、运送以及制作等每一环节,如果标本破烂不堪,翅破须断,对研究来说非常不便,大大减低了研究的价值,甚至成为完全无用的材料。
(3)正确记载:所有标本,一定要有正确的采集记载,记载项目至少应包括采集日期(年、月、日),采集地点(省、县、乡),和采集人姓名等三项。年、月、日中的“月”最好用罗马字来写,如2012年5月4日,可写作2012—V—4,若写为“5/4”或“4/5”由于各人习惯不同,容易混淆不清。采集地点一定要首先写上大地名,才不会发生错误。写上采集人的姓名,是表示对这些标本负责。除以上记载外还应该注意采集时的环境,其寄主系植物或动物,采集地点的海拔高度,采集方法,以及昆虫的生活习性等等都可以写在记录本上,而在标本上只要附一个相应的号码。
(4)爱护生物:采集昆虫标本时除去我们所需要的以外,不要滥杀乱采,尤其是有些昆虫分布地区很小,数量也极少,如一网打尽,则以后不易再采到,甚至可能绝种。特别是某地区的特产或我国的特有种类,更应加以保护。
1、采集昆虫的工具
(1)捕虫网:活泼的昆虫,飞着或停留着的都宜用网来捉,所以采集昆虫必须要有一个轻便的捕网和一个坚固的扫网,水里要用水网。
捕网:制作时先用粗铅丝弯成一个直径约1尺的网圈(见下图),两端折成直角固定在网柄上。网袋宜用细眼的珠罗纱或尼龙纱,白色或淡绿色都可以,但不能用深颜色的。网袋材料的细密要看采集的对象,飞行快的一定要用稀的网袋,才易通风;采集微小的昆虫一定要用密的网袋,采集蝶、蛾则要用柔软的网袋。
扫网:是专门用来在草丛中扫捕的网。网袋一般用白布或亚麻布制作,网圈要粗些,网柄要短(约50厘米)而粗。扫网是网底开口,用时将绳扎住,扫捕以后再打开网底以便倒出网底采集物。
水网:对生活在水中的昆虫采集,要用水网,一般用细铜纱或铅纱制作,也有用易渗水的布制成。
(2)吸虫管:对微小的昆虫采集,不但容易损坏,而且不易拿取,可以自制一个吸虫管来吸取(见下图)。
(3)毒瓶:采到的昆虫除要继续饲养的以外,在做标本以前一般要先杀死,虫死的越快则标本越易完整,否则,在瓶中乱跳乱撞极易损坏。毒瓶是采集时杀死昆虫的利器。这里介绍两种常用的毒瓶制作法:
*氰化物毒瓶:制毒瓶时,先选择广口的玻璃瓶或塑料瓶,配好严密封闭瓶口的软木塞(橡皮塞),放入适量(10—50克)氰化钾小块或粉末,然后放一层木屑,用玻棒将木屑压紧再在上面加上一层石膏糊即成(见下面右图)。石膏糊是以石膏粉加少量清水配成,以调到能流下为度。毒瓶要保持清洁,瓶内底部可放一、二层白纸,瓶中放入纸条以免虫体相互磨擦损坏。因氰化钾加水后放出氰化氢,毒性很强,在使用时,应特别注意安全,此外,氰化钾对人、畜都有剧毒,凡皮肤有伤口而触及或呼吸过长都易中毒。制作毒瓶时,室内应通风良好,配好后应仔细洗手。毒瓶要保管好,决不可疏忽大意。瓶外底部贴几条橡皮胶,以免瓶破碎时,毒品逸出。
*其它毒瓶:除用氰化物毒瓶外,也可以用三氯甲烷(氯仿)等麻醉剂,这类瓶塞要用软木,不能用橡皮,因橡皮容易被浸蚀膨胀而腐烂。在瓶底可放棉花来吸收放入的三氯甲烷或者四氯化碳(四氯甲烷),上面用厚纸隔开,纸片上钻些通气孔,以便毒气挥发,这类毒品熏杀时间要长,否则虫体容易复活。
(4)其它用具:采集袋、采集箱、三角纸包(下面左图)、活虫采集盒(下面右图)、指形管和小瓶、小镊子、折刀、枝剪和小锯、扩大镜、刷小虫用的毛笔、标签纸、铅笔和记录本等都要准备。如果要保存害虫危害植物的被害状或寄主植物的标本,还要准备植物标本夹、草纸以及采集箱等。
2、采集昆虫的方法
要熟悉一般的采集方法,以便根据各类昆虫的不同习性,到不同的环境去采集昆虫标本。采集方法多种多样,这里先介绍一般性的,其他的特殊采集法分别于各类昆虫采集法中叙述。
(1)网捕
有翅会飞的昆虫,或善飞善跳的昆虫(如蝗虫)不论在活动或静止时,一般都要用网捕捉,用网的方法有两种:一种是当虫入网后使网袋底部向上甩,连虫带网底翻到上面来;另一种是当虫入网后转动网柄,使网口向下翻,则虫也被封闭在网袋底部。不论用那种方法,或甩网袋,或翻网柄,或上或下,或左或右,可以根据所采集部位,以及虫的活动情况等自由运用,但目的是要达到使昆虫进入网底并封住网口。
昆虫入网后,还须取出装进毒瓶。在这一过程中,稍不注意就会前功尽弃。首先是不能由网口探看采到的标本,只能隔着网看。取虫时先用左手握住网袋中部,这时虫被束在网底,放开网柄,空出右手来取出毒瓶,瓶盖用握住网袋的左手帮助打开,再将毒瓶伸入网内,左手控制网袋让毒瓶进入而不让虫钻出,然后用毒瓶把虫扣住装进瓶内,这时左手可以放开网袋,把瓶塞盖好。
螫人的蜂类和刺人的猎蝽(食虫椿象)等昆虫,取时不要用手碰到它,可用毒虫铗夹取,或者将连虫带网的一部分塞入毒瓶,先熏杀再取出。翅很大的昆虫(如蝶类)在网中挣扎易坏,可先隔网捏住其胸部使用权它不易活动。
(2)扫捕
扫捕法主要用在大片的草丛和茂密的小灌木中,当采集者认为这些植物上藏有昆虫时,用扫网在上面左右摆动扫捕,一面扫,一面前进,将许多小虫集中到网底。如时间仓促,途中边扫边走,可以得到许多标本。扫网不但用于低矮植物,也可接上长柄在高的树丛中扫捕,但网袋应加长。
一般的扫网扫几下后用左手握住网袋中部,右手放开网柄,空出手来打开网底的绳,将扫集物倒入毒瓶中,等虫被熏杀后倒在白纸上进行挑选。
(3)振落
利用塑料布或白布等接在树下面,然后摇动或敲打树枝、叶,则有许多佯死性的昆虫掉下,可用镊子夹取或直接用手拿。另外有些昆虫一经振动并不落地,但由于飞动而暴露了方向,可以用网捕捉。采集时振动敲打植物,可以发现许多昆虫。
(4)搜索
除去在外面活动的昆虫外,很多昆虫都躲在各种隐蔽的地方,采集时要善于搜索。树皮下面和朽木里面是极好的采集处,可用剥皮网接着,用刀剥开松的树皮或腐朽的木头,能采到各类甲虫。砖头、石块下面也是采集昆虫的宝库,到处翻动砖石土块,一定有丰富的收获。采集无翅亚纲的昆虫,更要多依靠这种采集法,这些微小的昆虫可用毛笔轻轻扫入瓶中。
注意搜索蚁巢,可以采集并观察其共生的昆虫。其他如蜂、鸟、兽巢穴中都有许多昆虫栖息,值得仔细搜索采集。
(5)诱集利用昆虫对光线、食物的趋性来采集昆虫,是既省力又有效的方法,一般采用的有:
*灯光诱集
晚间在灯下有许多昆虫飞来,停在窗上、墙上或绕灯而飞,所以在灯光下可以采到许多标本。野外采集时可用电灯、汽油灯或油灯诱集昆虫。在没有月光而又无风的夜晚,选择一个植物茂盛,最好还有水流的地方,挂起一盏手提汽油灯,后面张开一块白布,下面用石块把布压住,可以诱来非常多的昆虫。
现在农村广泛应用黑光灯(光波3650埃)诱杀害虫(见右图),其诱虫效果比普通灯光要强得多。还有的把一只黑光灯和一只电灯组成双色灯,效果亦很好。
这种灯光诱集法在闷热的夏夜进行最好,阴天或雨后也可以,甚至在下着小雨,只要把灯和布遮好,照常可以进行诱集。
*糖蜜诱集
蝶和蛾喜欢吸食花蜜,许多甲虫和蝇类也常到花上,或集聚在树干流出的液体上,所以可用糖蜜诱集。一般是用粗红糖加酒和醋等(比例一般为酒占1/10,红糖和醋各半),在微火上熬成浓的糖浆。用时涂在树林边缘的树干上,白天常有蛱蝶等蝶类飞来取食,晚间可以诱到许多蛾类和一些甲虫。在不同的树干上,多涂几条糖浆带,用手电筒照着巡回检查,凡停息的可用毒瓶装,飞动的用网捕。“糖醋诱蛾”现在已被应用为一种防治害虫的方法。
3、采集昆虫的时间
昆虫种类繁多,生活习性很不一致。一年发生多少代,一代有多长时间,何时才开始出现,何时停止活动等等,各类昆虫很不相同。即使是同一种昆虫,在不同地区,不同环境条件下,也有所不同。所以采集昆虫的时间很难一致,应该因虫、因地制宜。
一天中采集的最好时间,也同样有所不同。一般为上午10时至下3时最合适,这是昆虫最活跃的一段时间,遇到的昆虫最多,宜于网捕,如利用振落等方法采集,则反以昆虫不活动的时间为佳。扫捕也不限于以上这个时间。另外有许多昆虫到黄昏时才开始出现,有的成群飞翔,易于网捕。夜间活动的昆虫种类更多,可以用灯光大批诱集。所以在任何季节,任何时间都可以采到昆虫。
二、干制昆虫标本的制作
为了使昆虫标本能够长久保存、备作研究和参考,采集的昆虫要加以整理,制成各式不同的标本。制作的昆虫标本,除了保持虫体的各部分十分完整外,还要求外表的美观,昆虫原来的颜色及各种不同的天然形象都应尽量保持,所以制作昆虫标本要有相当的技术,适当的工具和方法。
1、制作昆虫标本的工具
(1)昆虫针
是用不锈钢制成的,用于固定虫体位置。其长短粗细都有一定的标准,型号分为00、0、1、2、3、4、5、七种。0与00号是昆虫针中最短小的,长度仅有1厘米,顶端不膨大。00号最细,直径约为0、3毫米,又叫二重针,是专门制作微小昆虫标本时使用的。1—5号昆虫针都长约4厘米,顶端有膨大的圆头,号数越大,直径越粗(见右图)。
(2)三级台
又名平均台,是用三块长短不同、厚度相等的木板粘在一起,或钉在一起做成的。三级板的每一级是0.8厘米,三级共2.4厘米,中间钻有一个小孔。制作昆虫标本时将虫针插入孔内,使昆虫、标签在针上有一定的位置(见右图)。
(3)展翅板
展翅板是专作伸展蝶、蛾、蜻蜓等昆虫翅的主要工具,用较软的木料制成。展翅板的底部是一块整木板,上面装有两块木板,其中一块可以自由移动,以便调节板间缝隙的宽度。两板中间缝隙的底部铺上一层软木条,展翅板长33厘米,宽8厘米(见右图)。
(4)整姿台
用软而松的木板作成,长27.5厘米,宽15.1厘米,厚0.2厘米,板子的每一头钉上一块长方形的木板作为支柱,板子上面钻上许多小孔,小孔的粗细以昆虫针可以自由穿插即可。整姿台有两种用途:一为插虫用,即将采集来的昆虫经杀死后,放在其上,再用昆虫针刺穿,这样不易滚滑,且穿刺位置又准确;二是将昆虫穿刺后,将昆虫针尖穿过小孔,使昆虫的6只足伏在板子上,用镊子将足和触角摆好。
(5)还软器(见右图)
采集后保存起来的标本或远方寄来的标本,时间稍久便会变硬,制作标本时很容易损坏,须用标本还软器,使它还软后才能制作。用干燥器做的还软器是很方便的设备,使用时,在容器底部铺一层洗涤干净的砂粒,滴上少许清水,并加少量石炭酸,防止生霉。在瓷隔板上面放置欲要还软的标本,盖周围抹上凡士林油,盖好,密闭放置。经过数天,干硬标本便会还软。
(6)大头针展翅时用于固定纸条。
(7)粘虫胶:一般常用虫胶片经95%酒精溶解后使用,或用万能胶或其他快干的胶,粘住小形昆虫标本。
2、干制标本制作法
昆虫具有较坚硬的外骨骼,毒死之后,其内部的器官组织虽然干缩了,但仍可以保持原来的外形。不同种类的昆虫,制作过程不同,主要方法有:
(1)针插法
昆虫毒死后约10—16小时,趁虫体及附肢尚柔软时制作。制作时,根据虫体大小选用适当型号的昆虫针,体型中等的昆虫(如夜蛾类)一般用3号针;天蛾等大型昆虫一般用4号针或5号针;叶蝉、小蛾类等小型昆虫则用1号或2号针。昆虫针插入后应与虫体纵轴垂直,但不同目的昆虫插针部位有所不同:?鳞翅目、膜翅目、蜻蜓目、同翅目的昆虫是从中胸背面正中插入,通过中足中间穿出来;?蚊、蝇等双翅目昆虫从中胸的中间偏右的地方插针;?蝗虫、蝼蛄等直翅目昆虫是从前胸背板的后部、背中线稍右的地方插入;?鞘翅目昆虫插在右鞘翅基部距翅缝不远的地方;?半翅目昆虫插在中胸小盾片的中央略微偏右的部位。这种插针部位的规定主要是针插之后不会破坏鉴定特征(见下图)。
虫体在针上有一定的高度,将插有虫的针倒过来,放入三级板的第一级的小孔,使虫体背部紧贴板面,其上部的留针长度是0.8厘米。
经插针后的标本,插在软木板上或整姿态台上,将触角和足的姿势加以整理,尽量保持其自然姿态,整好后用纸条或虫针加以固定,然后放在烘箱中烘干。取出后,将针插入已写好的标签上,放入三级板的第二级的小孔内,使标签保持在第二级高度的水平位置上。这样,一个完整的针插标本就制作完成了。
(2)双插法及载虫插法
体形微小的昆虫有两种制作标本的方法,一般能够用00号或0号短针插上的,先按照前段所述各类昆虫的针插部位,依法插上,然后把短针插到三角形硬纸片或软木片上,再用长针把硬纸片或软木片插起来;不能用针插的微小昆虫,用粘虫胶粘在三角纸片的尖端,然后用针插在三角纸片的底边附近中部地方。纸片的形状(或废胶卷)以等腰三角形为好,底边的长度相当于两等边的一半,昆虫被粘在两等边的夹角上(见下图)。
(3)昆虫展翅法
为了研究方便,对蝶蛾类昆虫的标本必须将翅展开。其具体步骤是(见又图):选取大小适宜的昆虫针,将新鲜标本或还软以后的标本按三级板特定的高度插定,然后移到展翅板的槽内,虫体的背面与两侧的木板相平,调节展翅板中可活动的一块木板,使中间的空隙与虫体大小相适合,然后将螺丝旋紧以固定此板,两手同时用两根细昆虫针,沿翅的前缘,左、右拉动1对前翅,使1对前翅的后缘同在一条直线上,用虫针固定住,再拨后翅,将前翅的后缘压住后翅的前缘,左、右对称,充分展平。然后用透明纸条压住,以大头针固定。再整理一下触角,除很长者需要拉向后方外,一般都使其保持自然形状。将展翅板放在烘箱中或在室内放置一周左右,待标本干燥后取下。取下后,还要在标本的下方插上标签(利用三级板),这样一个展翅的标本,才算作成了。各类昆虫展翅的要求不一,原则是能充分露出翅面上的特征,并使外形美观。直翅目、半翅目、鳞翅目、脉翅目昆虫的两侧前翅后缘必须在一水半线上,后翅紧接前翅,不可被前翅掩盖(但鳞翅目的后翅前缘应有一部分被前翅掩盖)。同翅目、膜翅目昆虫的前后翅间有连锁器勾连,展翅时可以利用。双翅目昆虫的两侧前翅顶角必须和头部平齐,鞘翅目必要时也可以展翅,其两侧后翅的前缘须成一直线。
三、幼虫标本的保存
1、浸制法
采来的幼虫,让它饥饿几小时,待彻底排净粪便后,放入烧杯中用开水煮,煮的时间视虫体大小而定,一般煮到虫体僵硬即可。水煮后,虫体内的酶破坏,保存的幼虫不易变黑;末经煮过的幼虫放入保存液中,虫体往往收缩,许多特征不易看出。
幼虫煮好后,放入保存液中,但较大的幼虫含水量过多,在浸泡后要换几次保存液,才能长期保存,否则,虫体易腐烂。
幼虫保存液一般用具有防腐性和固定虫体组织能力的化学药品配制成。经常使用的有下列几种保存液:
*福尔马林液福尔马林(即40%甲醛)1份,水17—19份。
此液配制简单,保存大量标本时,非常经济,保存昆虫的卵效果较好。缺点是气味恶劣,标本组织较硬,对操作人的双手有一定腐蚀性。
*75%酒精保存液95%酒精75毫升,水20毫升,甘油1—2滴(甘油的作用是延缓酒精的蒸发并保持虫体柔软)。
此液配制简单,效果好。但大量使用时,酒精的用量大,不够经济。
*冰醋酸、福尔马林保存液冰醋酸5毫升,福尔马林(即40%甲醛)4毫升,水100毫升。此液经济、简便。
*醋酸、福尔马林、酒精混合保存液80%酒精15份,福尔马林(即40%甲醛)5份,冰醋酸1份。
此种保存液对昆虫内部柔软组织固定效果好,缺点是日久发生微量沉淀。
*酚(即苯酚、石炭酸)1份,冰醋酸1份,水8份。此液可以避免用易燃的酒精及其腐蚀作用的福尔马林,携带较安全。
保存幼虫的体色是昆虫标本制作中一个长期没有得到完满解决的问题,还需要我们去试验研究和实践。下面介绍目前较常用的方法。
*绿色幼虫标本保存液
注射剂:95%酒精90毫升,甘油2、5毫升,福尔马林2、5毫升,冰醋酸2、5毫升,氯化铜3克。
浸渍液:冰醋酸5毫升,福尔马林4毫升,水100毫升。
浸渍方法:将已饥饿几天的绿色幼虫,从肛门注入注射剂,放置培养皿中10小时,让注射剂渗透到体躯各部分,然后浸在上述浸渍液中,约20天后更换一次浸渍液。
*黄色幼虫标本保存液
注射剂:苦味酸饱和水溶液10毫升,福尔马林25毫升,冰醋酸5毫升。
浸渍液及操作方法同绿色幼虫。
*红色幼虫标本保存液
浸渍液:硼砂2克,50%酒精100毫升。
浸渍方法:将饥饿过的幼虫,直接投入浸渍液中,不必先用开水烫死。
2、干吹幼虫标本制作法
用笔杆压在幼虫头部紧后方,用力向后一推,则幼虫的内脏被压出肛门,只剩下幼虫的一层体壁,然后在烤罩(可以用玻璃灯罩,罩内放少量沙土,架在酒精灯上便可)内用一个小打气橡皮球把虫体吹胀(打气球的前端接一皮管,管端接一玻璃尖管,塞在幼虫肛门内)维持几分钟,待虫体烤干后即成。可以如此保存,也可在肛门后加插一根火柴梗,用以插虫针和标签,象成虫一样保存在标本盒内。干吹法所制成的标本,其优点是不需要保存液,便于展览,但色泽几乎完全退了,而且体毛容易损坏,内部器官完全丢失,不适于研究用。
四、昆虫生活史纸盒标本制作
此法是将用前面各种方法做好的标本集中起来,按照昆虫一生的发生顺序如卵、各龄幼虫、蛹、成虫,安排在特制的昆虫标本盒内。再将其他与此种昆虫有关的材料同时放入盒内,如有被害的植物、天敌,防治情况照片等,都应尽量放在里面。昆虫盒内的被害物及昆虫都尽量保持其天然姿态和形状。盒内还附有标本名称、采集时间和地点的标签。
绿色植物标本的制作是用醋酸铜粉末,徐徐加入50%醋酸液内,然后用玻璃棒搅拌,使达饱和状态时为止,作为原液。用时将原液加水稀释,其比例为1/4。将稀释液及植物标本同时放入大型烧杯中加热至沸待标本渐变为黄色时,再继续加热,又变为绿色,当原有色泽重现时,便立即停止加热(所煮的时间长短,依叶的厚薄软硬而定)。取出标本,清水洗涤,放在植物标本夹中,使其干燥便可使用。如用浸渍标本,洗涤后可浸泡在5%的福尔马林中保存。
五、蝶、蛾贴翅标本制作
鳞翅目昆虫的翅上覆盖有各种色彩的鳞片和毛,组织各种花纹。各种蝶、蛾均有其独特的色彩和花纹,这是识别它们常用的简易方法,为便于携带和对照参考,常将蝶、蛾的翅制成贴翅标本。
把展翅的蝶、蛾标本用剪刀沿翅基部剪下,用镊子轻轻地把翅放在一定大小的较硬的透明塑料薄膜上,摆正位置,然后用透明胶带纸小心粘上即成。这样制成的象邮票一样的贴翅标本,色彩鲜艳、久不退色,美观实用、便于保存,也是一种很好的观赏艺术品。若用新鲜的蝶、蛾制作时,要多加小心,因为它们的后翅往往卷缩,不易伸展贴平。
六、昆虫玻片标本的制作
为了解昆虫的细微结构,必须将昆虫材料经过制片的处理,才能在显微镜下观察各种细微结构。掌握显微镜制片技术,在昆虫学研究工作中是不可缺少的一环。
1、制片的一般方法
(1)加拿大树胶法
其步骤为:*先用10%氢氧化钾使虫体内部柔软,组织溶解,并使几丁质色素减退,然后用水将氢氧化钾洗去;*依次经过50%、70%、80%、90%、100%酒精脱水:*以冬青油或二甲苯透明;*最后用加拿大树胶液将标本封于玻片上。这种操作应在同一个有盖的小玻皿内进行。在更换液体时用吸管将皿内液体吸出,再用另一吸管吸取其他液体放入皿内,切勿将标本从一皿移入另一皿中,以免损坏标本。只是当标本在冬青油内透明而变硬后,方用解剖针小心的将标本挑出置于玻片上,用加拿大树胶封固。至于在每种液体中所留的时间,依标本的大小而定。
(2)阿拉伯胶氯醛法
这类封固剂,配方以普里氏(PURI)及霍尔氏(HOYER)的两种配方最为适用,其中又以霍尔氏配方为好,其优点是标本不需脱水。将标本直接置于玻片上,加上本液,加盖片封固,封固的玻片标本,在数小时内即可透明,然后将标本置于室内37℃温箱中待干,干后再用磁漆指甲油使盖玻片四周封固,以免吸收水分;这点在天气潮湿的地方尤其重要。
以上两种方法各有利弊:普里氏法,手续复杂,费时较多,但作成的玻片标本保存较久。霍尔氏法,手续简单,费时较少,但作成的标本持久性较差。
成虫
*整体封片
目的是观察成虫的整体形态。用加拿大树胶法或阿拉伯胶氯醛法均可。如果成虫是在酒精或福尔马林液中固定保存的标本,先将它们放在清水内洗涤数次,然后放入10%氢氧化钾内浸泡。如果是刚杀死的新鲜标本或干保存的标本,必须先用70%酒精浸湿,然后再浸入氢氧化钾溶液中。在浸泡至适当程度后吸去氢氧化钾液,加水浸2—3次,每次约半小时。然后依加拿大树胶法经酒精脱水,冬青油透明。每次更换液体约需0、5—1小时,最后将标本置于玻片上,加1—2滴加拿大树胶封固。经氢氧化钾液浸泡后,再用水浸,洗净的标本不经脱水,即将标本取出置玻片上,加阿拉伯胶氯醛液,直接封固亦可。成虫的整封标本一般以侧面向上为宜,这样可以看到它身体各部分的构造。
*部分封片
雄性外生殖器:是鉴定昆虫的重要特征之一。方法是用尖而利的小剪,将腹部的最末2—3节处连雄性外生殖器剪下。剪下的雄性外生殖器置于玻璃皿中,加70%酒精浸泡不久后将酒精液吸出,再加入10%氢氧化钾浸泡至透明为止。然后依加拿大树胶法封固。
翅:用氢氧化钾浸泡过的成虫标本的翅,不适于制片。制作双翅目、膜翅目昆虫的翅玻片标本时,取干制标本,在解剖镜下用针自翅基处将翅取下,直接放在载玻片上加二甲苯一滴使透明,然后加加拿大树胶一滴封固。
其它部位:如口器部分、咽、雌性生殖器官等的封固,都必须解剖后将各部分分别制片。有许多昆虫,由于解剖出的部分极小,就必须先将标本依加拿大树胶法进行处理,待到冬青油这一步骤后,即在冬青油中进行解剖,将解剖出的各部分构造,分别置于玻片上,各加一滴阿拉伯胶,然后用玻皿将它盖好,以免落入灰尘,放置24—28小时待胶变硬后,取一小块盖片在上滴一滴胶,将此盖片翻过来盖在标本上面,这样作可使标本所处的位置不易移动。
幼虫:
*整体封片
为了观察微小幼虫的整体形态,需要整封。一般是使虫体背面向上封固,方法与成虫相同。但由于幼虫体壁薄,不用氢氧化钾液浸泡,而可以用各级酒精脱水至冬青油中透明,最后用加拿大树胶封固。最重要的是微小昆虫幼虫在脱水时在同一玻皿内进行,更换酒精时用吸管吸出皿内液体再用吸管加新液,不可将标本由一皿移至另一皿内,否则幼虫体毛易受伤而失去自然状态。在用阿拉伯胶氯醛液封固时更为简单,即有水洗净固定液后,将幼虫取出,置于玻片上,加一滴阿拉伯胶氯醛液封固。
*部分封片
为了详细观察幼虫的某些构造,如口器各部分等,可解剖下来单独封片。微小昆虫幼虫的解剖也是在冬青油内进行,封固法也用加拿大树胶法。
蛹:
为了显示微小昆虫整个蛹的形态,常需要侧面向上整封。但是为了详细检查蛹的构造,常将蛹的头胸部与腹部割开,将头胸部侧面和腹部背面向上,置玻片上封固,封固的方法与幼虫相同,但较大而较老的蛹需要经氢氧化钾处理。
幼虫皮、蛹皮的制作:
系统的昆虫学研究,常将同种昆虫的末龄幼虫皮、蛹皮与羽化出的成虫,编成同一号码保存。
*幼虫皮的封固
将幼虫皮连固定液倾入玻皿中,固定液吸出换以清水,用大口吸管吸幼虫皮于载玻片上,用解剖针将其略为伸展,使褶皱伸开,然后以滤纸将水吸干。待水几乎完全干燥时加一滴95%的酒精,使幼虫皮变硬。最后加一滴水将酒精洗去,将水吸干,再加一滴阿拉胶伯氯醛液封固。如用加拿大树胶封固法,在加95%酒精使幼虫皮变硬后,再以100%酒精使完全脱水,吸去酒精加冬青油透明,然后以加拿大树胶封固。
*蛹皮的封固
方法与幼虫皮同,但宜将头、胸部与腹部分开。将头、胸部自背裂处左右展开,使腹面向上,而腹部使背面向上封固于同一玻片上。
卵:
由于卵的外壳坚硬,液体不易浸入,永久性的封固制片极为不易。卵的制片,可用加拿大树胶法及阿拉伯胶氯醛法,但用前法时,在脱水、冬青油及树胶各步骤中,都必须处理较长时间方可避免卵的收缩。
上述的方法,均称为永久性制片,为了临时检查,也可以作临时性制片。如用纯碳酸、乳酚、水合氯醛剂,或氯酚水合氯醛等。封固方法非常简单,将固定的标本(成虫、幼虫或卵)置玻片上,将上述任何一种溶液滴于玻片上盖以盖玻片,半小时后标本即透明,可以进行检查。临时封制的标本,经检查后仍可放入保存液中保存。
附:制片试剂配制
1、普里氏(PURI)胶配制法
阿拉伯胶8克,蒸馏水10毫升,水合氯醛30克,甘油7毫升,冰醋酸3毫升。
将胶磨成粉状,置于小烧杯中加入蒸馏水,再将烧杯置于水浴锅内加热至80℃。用玻棒搅动,胶溶后加入水合氯醛,待溶解后,再加甘油及冰醋酸,搅拌均匀后,用薄棉过滤即可。
2、霍亦氏(HOYER)胶配制法
阿拉伯胶30克,蒸馏水50毫升,水合氯醛200克,甘油20毫升。配制法与上法相同。
3、加拿大树胶配制法
加拿大树胶若干克,二甲苯若干毫升。两者混合,待溶化后过滤使用。配成的树胶,以微具流动性为度,用玻棒粘取时,以不拉丝为合适。
4、乳酚配制法
石炭酸(结晶)20克,纯乳酸20毫升,甘油40毫升,蒸馏水20毫升。依次混合。
5、水合氯醛剂配制法
水合氯醛57克,冰醋酸6毫升,蒸馏水加至100毫升。将水合氯醛剂溶于适量的蒸馏水中,然后加冰醋酸与蒸馏水至100毫升。
6、乳酸水合氯醛配制法水合氯醛0、5克,蒸馏水1毫升,甘油1毫升,纯乳酸2毫升,冰醋酸2—4滴,40%甲醛0、5毫升。将水合氯醛溶于水后,再依次加入其他成份。
7、寄生蜂直接封片封固剂
水合氯醛50克,树胶30克,冰醋酸5毫升,甘油1毫升,蒸馏水20—30毫升。
8、胶片液
取X光片或变通照相胶片,用碱水或氢氧化钾溶液浸泡数小时后,将片上感光膜洗去。后用水冲洗干净晾干,即成透明胶板。胶板可用以制作微小昆虫的针插标本,又可将胶板切成小块置入瓶内,加工业用香蕉水使溶解成胶片溶液,可用以封固盖片边缘。
9、酒精稀释方法
稀释酒精等溶液,常常直接利用量筒。例如用95%酒精配成浓度达70%的酒精,其方法如下:
将酒精倒入100毫升量筒内,容量达到与需要稀释的百分率数值相等的刻度,稀释到70%,即倒至70毫升处,再加水到与酒精浓度原有百分率相等的数值处,如原有浓度为95%即倒至95毫升处。其他浓度的稀释法可依此类推。
2、几种昆虫的制片法
(1)黑尾叶蝉口器玻片标本制作法刺吸式口器的昆虫种类很多,以黑尾叶蝉为材料,具体步骤如下:
?固定
取黑尾叶蝉活虫,用70%酒精杀死,固定。置双筒解剖镜下观察,用小镊子及解剖针轻轻将头部取下,放入10%氢氧化钾溶液内,浸一天左右,以使头部透明为限,或加热煮5—10分钟使头部透明,这样可缩短浸渍时间,使虫体内部软组织溶解,头部几丁质减退。
?脱水头部透明后,移入玻皿内,用蒸馏水清洗2—3次,然后依次50%、70%、80%、95%、100%酒精中脱水5—10分钟。
?透明经脱水后的标本,用滤纸吸干水分后,用二甲苯透明,如材料在二甲苯中有混浊现象,说明脱水不好,须再移入无水酒精中脱水5—10分钟,再用二甲苯透明。
?整姿封盖封盖前应将材料放在玻片中央,然后小心挑出口针,不能挑断,整理好姿式,再滴上一滴中性树胶,盖上盖玻片封固,作好的玻片,贴上标签。
以上操作的注意事项:
?操作过程应在同一个有盖的小玻璃皿内进行,在更换液体时,用吸管将皿内液体吸出,再另用吸管吸取其他液体放入皿内,切勿将虫体从一皿移入另一皿中,以免损坏标本。
?逐级脱水时,小玻璃皿必须加盖,以避免空气中水分侵入。
?如制作玻片标本时,因特殊原因不能完成全过程时,材料必须移入70%酒精中保存,以免材料变脆。
?制成的玻片放入40℃左右的恒温箱内2—3天,即行干透而成永久性的玻片标本。
(2)蚜虫玻片标本制作法蚜虫种类繁多,体小,在鉴定“种”时需制成玻片标本,蚜虫玻片标本的制作方法:
?取若干活蚜虫,用70%酒精杀死,然后取出每个蚜虫,用“0”号昆虫针从胸部腹面后足基部穿孔1—2个,便于清除体内组织。
?将穿刺后的蚜虫放入10%氢氧化钾溶液内,如有翅蚜,则用水浴加热,以免翅损坏(无翅蚜虫可直接加热),加热15—20分钟。时间长短以蚜虫大小和除去组织的难易而定。在加热中必须注意蚜体变化情况,加热到蚜体透明为好,如不能完全清除体内组织,在透明液内仍能完全透明。或者放在10%氢氧化钾溶液中浸泡一昼夜,不必加热。
?煮过的标本,移入盛有蒸馏水的皿内,清洗1—2次后,移入70%酒精内略加脱水,再迅速依次移入80%、95%、100%酒精中各脱水1—2分钟后,移入冬青油(或二甲苯)透明。有翅蚜只要在80%酒精中脱水一次即可移入冬青油透明。
?在载玻片上滴一滴中性树胶,将透明的标本用挑针移到载玻片上,在解剖镜下调整姿势。然后轻轻盖上盖玻片,写好标签,再放到40—50℃恒温箱内2—3天,即行干透而成永久性的玻片标本。
(3)介壳虫标本保存与制片
介壳虫的保存:绵蚧科、尾蚧科和粉蚧科的介壳虫,以及蜡蚧科和红蚧科的若虫及幼嫩的雌虫最好保存在70%酒精中,制成的玻片才便于研究。
裸介壳虫永久玻片制作法:在制作时,必须将活的材料放在70%酒精中,固定2小时以上。然后在双筒镜下用眼科小剪刀或昆虫针沿背面或腹面剖开。被剖开的介壳虫可放入80%氢氧化钾溶液中12—18小时,以后可放入水浴中加热10—30分钟。已经透亮的介壳虫从碱液取出而浸入蒸馏水或热水中,用昆虫针和毛笔清除内含物。清除干净的虫体浸于水中一昼夜,并换水8—10次,浸渍过的昆虫投入70%酒精中10—15分钟,然后在品红溶液中染色。很硬化的虫体只需染色1—5分钟,体软者则需2—3小时甚至24小时。染色的目的是为了使腺体和虫体比较硬化的部分比不太硬化的部分更显示在清晰的着色底面上。将虫体从染料中移入浓度逐渐增大的酒精中,即在70%、90%、95%或100%酒精中各15—20分钟。然后移入丁香油中静置30—60分钟,然后在二甲苯中15—20分钟。再将虫体从二甲苯中移于载玻片上,不要使虫体产生绉褶,滴上加拿大树胶,盖上盖玻片。
盾介壳虫制片法:从介壳下将雌虫取出,浸于盛有80%氢氧化钾溶液的磁坩埚中12—18小时,从碱溶液中取出呈透明状态的虫体放入蒸馏水或热水中,末呈透明的虫体,可放在8%氢氧化钾溶液中加热到80—90℃直到透明为止,但不能煮沸。如雌虫体内有卵粒,则在加热时必须剖开虫体胸部,排出内容物,千万当心不要弄破臀板。已经呈透明状态的虫体放入水中,往后的手续同上节所述。
品红溶液的配法:1克品红溶于10毫升的95%酒精中,在此溶液中加入5毫升的冰醋酸和石炭酸,然后逐渐加入100毫升的蒸馏水中。过24小时后将品红溶液滤清。
碱性品红可以溶解于95%酒精中达饱和状态。在这种情况下,虫体在染色以前经过酒精脱水,从品红中直接移入95%酒精中或无水酒精中。
(4)蓟马玻片制作法蓟马是微小昆虫,在鉴定时必须制成玻片,其方法步骤可参照(1)加拿大树胶法。
(5)赤眼蜂等小型寄生蜂的玻片制作法
加拿大树胶法是最基本的方法,制成的标本可长期保存,标本质量也较好,用下述方法较简单,体不宜长期保存。
将寄生蜂标本直接从保存液(70%酒精)中取出,放在玻片上的水合氯醛树胶液中,摆好位置,加盖玻片即成。若是活蜂可用40—50℃的热水将其迅速杀死,这时寄生蜂的翅和触角就自动张开,然后移至70%酒精中,经30—60分钟后取出整姿封片。上述封片待水合氯醛树胶干固后,用指甲油或白漆环封,可延长保存时间。
七、昆虫标本的鉴定
1、意义
这是分类学的基本任务。就是把自然界中,个体间的几乎是无穷无尽的复杂的差异加以整理,分成为易于认识的类群,找出这些分类单元的重要性状,以及与相似单元之间的稳定区别。而且,必须为这些单元订出“科学的”名称,便于在全世界范围内共同使用这一“科学的”名称。鉴定工作的重要意义就在于,如果不对一切具有生态意义的种加以精确的鉴定,就不可能作出科学的生态调查。同样,在实验生物学中也不能作出科学性的实验,害虫防治上也不能订出真正科学的对策来。有很多属会有两个、三个或更多十分相似的种,它们之间的差异,在生理上往往比形态上更为显著,常常会有两个人研究某一个“种”的生理而得出不同的结果,这是因为某人研究的是甲种,而另一人研究的是乙种或甲乙的混合系。
2、步骤
(1)目和科的初步检索(2) 属和种的检索
(3) 查对近期出版的名录(4)查对当代文献目录
(5)查询原始文献(6) 与模式标本或其他正确鉴定的标本作对比