磷酸盐缓冲液的配制
磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂,由于它们是二级解离,有二个pKa值,所以用它们配制的缓冲液,pH 范围最宽:NaH2PO4:pKa1=2.12,pKa2=7.21; Na2HPO4:pKa1=7.21,pKa2=12.32
配酸性缓冲液:用NaH2PO4,pH=1~4,
配中性缓冲液:用混合的两种磷酸盐,pH=6~8,
配碱性缓冲液:用Na2HPO4,pH=10~12。
用钾盐比钠盐好,因为低温时钠盐难溶,钾盐易溶,但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时,只能用磷酸钠而不能用磷酸钾,因为SDS(十二烷基硫酸钠)会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。
磷酸盐缓冲液的优点为:①容易配制成各种浓度的缓冲液;②适用的pH范围宽;③pH 受温度的影响小;④缓冲液稀释后pH变化小,如稀释10倍后pH 的变化小于0.1。
其缺点为:①易与常见的钙Ca2+离子、镁Mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀;②会抑制某些生物化学过程,如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用.
pH | 0.2mol/L NaH2 PO4(ml) | 0.2mol/L Na2HPO4(ml) |
5.7 | 93.5 | 6.5 |
5.8 | 92.0 | 8.0 |
5.9 | 90.0 | 10.0 |
6.0 | 87.7 | 12.3 |
6.1 | 85.0 | 15.0 |
6.2 | 81.5 | 18.5 |
6.3 | 77.5 | 22.5 |
6.4 | 73.5 | 26.5 |
6.5 | 68.5 | 31.5 |
6.6 | 62.5 | 37.5 |
6.7 | 56.5 | 43.5 |
6.8 | 51.0 | 49.0 |
6.9 | 45.0 | 55.0 |
7.0 | 39.0 | 61.0 |
7.1 | 33.0 | 67.0 |
7.2 | 28.0 | 72.0 |
7.3 | 23.0 | 67.0 |
7.4 | 19.0 | 81.0 |
7.5 | 16.0 | 84.0 |
7.6 | 13.0 | 87.0 |
7.7 | 10.5 | 89.5 |
7.8 | 8.5 | 91.5 |
7.9 | 7.0 | 93.0 |
8.0 | 5.3 | 94.7 |
Na2HPO4·2H2O分子量= 358.22,0.2 mol/L溶液为71.64克/升。
NaH2PO4·2H2O分子量= 156.03,0.2 mol/L溶液为31.21克/升.