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邻二氮菲分光光度法测定铁的条件试验及络合物组成的测定
一、实验目的：
1. 学习721型分光光度计的使用方法；
2. 学习测绘吸收曲线的方法；
3.学习如何选择吸光光度分析的实验条件。
二、实验原理：
显色反应受各种因素的影响，如：溶液的酸度，显色剂的用量，有色溶液的稳定性，温度，溶剂，干扰物质等。
条件试验的简单方法是：变动某实验条件，固定其余实验条件，测得一系列的光度值，绘制吸光度——某实验条件的曲线，根据曲线确定某实验条件的适宜值。
三、主要试剂和仪器：
1.铁标准溶液
2.邻二氮菲溶液（1.5g/L)
3.盐酸羟胺水溶液（100g/L)
4.NaAc溶液（1mol/L)
5.氢氧化钠溶液（1mol/L)
6.分光光度计，50mL比色管8支（或容量瓶8个）
四、实验内容：
⒈吸收曲线的绘制和测量波长的选择
用吸量管吸取2.00mL1.0×10- 3mol〃L-1铁标准溶液，注入50mL比色管中,加入1.00mL10%盐酸羟胺溶液，摇匀，加入2.00mL0.15%邻二氮菲溶液，5.0mL1mol/LNaAc溶液，以水稀释至刻度。在光度计上用1cm比色皿，采用试剂溶液为参比溶液，在450～550nm间，每隔10nm测量一次吸光度（在最大吸收波长处，每隔2nm），以波长为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸收曲线，选择测量的适宜的波长。
⒉显色剂条件的选择（显色剂用量）
在7支50ml比色管中，各加入2.00mL1.0×10-3mol〃L-1铁标准溶液和1.00mL10%盐酸羟胺溶液，摇匀。分别加入0.30，0.50，0.80,1.00，1.50,2.00及4.00mL0.15%邻二氮菲溶液，5.0mL1mol/LNaAc溶液，以水稀释至刻度，摇匀。在光度计上用1cm比色皿，采用试剂溶液为参比溶液，测吸光度。以邻二氮菲体积为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制吸光度-试剂用量曲线，从而确定最佳显色剂用量。
3. 溶液pH值的影响
取8只50mL比色管，每个加入2.0mL的10-3 mol/L铁标准溶液，和1.0 mL 100g/L盐酸羟胺溶液，摇匀后放置2 min，加入2mL1.5g/L邻二氮菲溶液，然后再Y用5mL吸量管分别加入0、0.02、0.05、1.00、1.50、2.00、3.00mL 1mol/L的NaOH溶液摇匀，以水稀释至刻度，摇匀。以水为参比，用1cm吸收池测量各溶液的吸光度。绘制A-pH曲线，确定适宜的pH范围。
4.显色时间的影响
取一个50mL的比色管，加入2.0mL 的10-3 mol/L 铁标准溶液，1.0 mL100g/L 盐酸羟胺，摇匀。再加入2mL 1.5g/L 邻二氮菲，5ml 1mol/LNaAc,以蒸馏水稀释至刻度，摇匀。在选定的波长下，用1cm 比色皿，以蒸馏水作为参比溶液，测定吸光度。测量放置5min ,10min,15min ，20min ,30min ,60min ,120min相应的吸光度。以时间作为横坐标，吸光度为纵坐标。在坐标纸上绘制曲线，从曲线上观察显色反应完全所需的时间及其稳定性，并确定合适的测量时间。
5.邻二氮菲与铁的络合比测定（摩尔比法）
取8个50ml 比色管，各加入1.0mL 的10-3 mol/L 铁标准溶液，1mL100g/L盐酸羟胺溶液，摇匀。再依次加入1.5g/L邻二氮菲溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL、4.0mL、4.5mL，各加入5mL 1mol/LNaAc 溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。放置1min，在选用的波长下，用1cm比色皿，以蒸馏水为参比溶液，测定吸光度。以邻二氮菲与铁的浓度比为横坐标，吸光度为纵坐标作图，根据曲线上前后两部分延长线的交点位置，确定三价铁离子与邻二氮菲的络合比。
五、数据记录及处理：
1.吸收曲线的绘制
| 波长/nm | |||||||
| 吸光度A |
2.显色剂用量
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| 显色剂用量/mL | ||||||||
| 吸光度A |
3.溶液酸度的影响
| 编号 |
| VNaoH/mL |
| pH |
吸光度A |
4.显色时间的影响
| 时间 |
| 吸光度A |
5.邻二氮菲与铁的络合比测定
| 编号 |
| 邻二氮菲浓度/(moL/L) |
| Cphen /CFe |
| 吸光度A |
六、实验注意事项
1.不能颠倒各种试剂的加入顺序。
2.最佳波长选择好后不要再改变。
3.同一组溶液必须在同一台仪器上测量。
4.分光光度计必须预热30分钟，稳定后才能进行测量。
5.每次测定前要注意调满刻度。
七、思考题
1.用邻二氮菲测定铁，盐酸羟胺起什么作用？如果测定混合铁中的亚铁含量，需要加入盐酸羟胺吗？
答：把三价铁离子还原成二价铁离子，因为后面加入的邻二氮菲只能和二价铁离子形成络合物。如果测定混合铁中的亚铁含量，则不需要加入盐酸羟胺。
2.使用分光光度计应注意什么？
答：若连续测定时间过长，光电管会疲劳，造成读数漂移，每次读数后应随手打开试样试盖。
3.参比溶液的作用是什么？
答：参比溶液的作用是扣除背景干扰。
4.根据条件试验，邻二氮菲分光光度法测量铁时，主要需要控制哪些反应条件？
答：主要需要控制：溶液的酸度，温度，显色时间，邻二氮菲的用量等。
