爱华网福寿螺感染广州管圆线虫检测方法与检测注意事项
方彦炎, 李莉莎, 谢汉国,张榕燕, 郑国斌
( 福建省疾病预防控制中心, 福建福州350001)
【摘要】目的 比较2 种检测广州管圆线虫第Ⅲ期幼虫的方法,采用简便、快速、检出率高，适用于疫源地调查。方法 用广州管圆线虫Ⅰ期幼虫，人工感染阴性福寿螺85只，6周后随机肺检法镜检福寿螺10只，以确定是否全部福寿螺人工感染成功，如证实成功，计数Ⅲ期幼虫螺肺结节数。螺肺检法、均浆沉渣镜检法2种方法分别对已确认全部福寿螺感染Ⅰ期幼虫或发育为Ⅲ期幼虫，比较2 种方法检查福寿螺体内广州管圆线虫第Ⅲ期幼虫的效果。结果 2 种方法检查福寿螺广州管圆线虫第Ⅲ期幼虫阳性率分别为100 %(50/50 )和86 %(43/ 50) ,差异有统计学意义( P < 0. 01)。结论 螺肺检法检查螺内广州管圆线虫第Ⅲ期幼虫的方法较适合于疫源地流行病学调查和分析判断。组织匀浆法：检出率低，漏检率高，计数螺感染率和感染度不准，误差大，不适用于疫源地调查。
【关键词】广州管圆线虫；第Ⅲ期幼虫；福寿螺；检测方法；
广州管圆线虫感染引起广州管圆线虫病，福寿螺(大瓶螺) ,终末宿主为鼠类动物。1996 年前国内仅报告4 例广州管圆线虫病，2001 年福建省报告首例人广州管圆线虫病[1,2]；2003 年福建省长乐市发生学生人群广州管圆线虫病暴发感染[3 ]；。2006 年北京引起的局部小范围的广州管圆线虫病的暴发，均因误食感染性福寿螺引起[4]。前年调查发现漳州地区个别地方商贩用福寿螺加工成品鲜螺肉，供应给馆店或酒店，由于广州管圆线虫病病例的逐年增加，疫源地流行病学的调查分析显得尤为重要。研究表明，广州管圆线虫中间宿主福寿螺第Ⅲ幼虫感染检查方法可以用于疫区的流行病学的调查[5]。
检查福寿螺体内广州管圆线虫第Ⅲ期幼虫的方法主要有螺肺检法和组织匀浆沉渣镜检法] ,本实验拟采用以上2 种方法检查疫区福寿螺广州管圆线虫第Ⅲ期幼虫感染情况比较2 种方法的检查效率，寻求快速、准确的检查手段，利用其中检查效率高、方法简单、速度快的方法对福州地区和漳州地区广州管圆线虫病疫区进行流行病学调查,了解疫区福寿螺感染程度,并进行疫源地分级,以期建立高效、简便、易行的流行病学调查方法。
材料和方法
1 中间宿主福寿螺的采集在福州地区连江县、闽侯县等疫区和非疫区，疫区选择居民区附近的水塘、沟渠等环境，捕捉可能感染Ⅰ期幼虫福寿螺。非疫区选择无居民区旷野的水塘、沟渠等环境，捕捉无感染Ⅰ期幼虫福寿螺。
2 广州管圆线虫第Ⅲ期幼虫检查
2.1 螺肺镜检法 福寿螺敲碎去壳，沿肺外套膜左侧至后侧剪开，将外套膜向右侧翻开，露出椭圆形的白色或淡黄色的肺囊（图3），剪开囊带(双层) 两边缘，翻开单层平铺于载玻片上（图4），解剖镜下检查有无幼虫结节，有幼虫结节可用解剖针直接从结节处挑出Ⅲ期幼虫（图6）。
2.2 组织匀浆沉渣镜检法 将采集的福寿螺洗净去壳。软体组织用高速组织捣碎机充分捣碎成糊液，用不锈钢滤网40目清水冲洗，沉淀20 min，倒掉上清液，再加清水沉淀20 min，倒掉上清液，取沉渣滤液直接倒入平皿中在解剖镜下镜检。
结果
1.检出率的比较 螺肺镜检法、组织匀浆沉渣镜检法检出率分别为100%与86 %，统计分析有显著性，显示两种检测方法有不相似的效果。
2.检出速度的比较 螺肺镜检法、组织匀浆沉渣镜检法，检测到螺肺首条幼虫时间分别为约0.6分钟和12.45分钟，实验显示：螺肺镜检法速度明显快于组织匀浆沉渣镜检法，螺肺镜检法检测完整一只螺肺结节幼虫所需时间约4.31分钟。而组织匀浆沉渣镜检法，所需时间约97.46分钟，统计分析差异有显著性。
表1 两种方法检测福寿螺组织中的广州管圆线虫Ⅲ期幼虫的效果
组 检测方法 检测数量 检测时间(分) 感染螺检出率%
只①②
1肺检法500.64.31100
2匀浆法5012.45 97.4686
3.两种检测法的优缺点比较 肺检法检查Ⅲ期幼虫,并计数Ⅲ期幼虫，优点：简便、快速、检出率高、计数幼虫准确，用螺肺结节内幼虫直接感染实验大白鼠成功率高，感染大鼠幼虫成活率高，适用人工感染大鼠，也适用于疫源地调查。但组织匀浆法：检出率低，漏检率高，计数螺感染率和感染度不准，误差大，不适用于疫源地调查。
4.解剖镜使用注意事项：肺检法看肺结节采用下灯光照明，肺结节清楚，折光性强，不易漏检（图5）。匀浆法：看Ⅲ期幼虫采用上灯光照明，Ⅲ期幼虫清楚，折光性强，不易漏检（图6）。但如解剖镜使用不当，Ⅲ期幼虫较小约490um×23 um，焦距调整不好也易漏检，一次镜检沉渣平皿中
液体不能太多太浓，应适中能透明到平皿底中。
图1广州管圆线虫成虫图2 广州管圆线虫卵
图3 福寿螺肺剖开前图4福寿螺肺剖开后黑点为Ⅲ期幼虫结节
图5 感染12周螺肺结节逐步放大图6Ⅲ期幼虫逐步放大
图7福寿螺壳外观与田螺相似图8福寿螺卵鲜红色
4.疫源地分级采用肺检法，速度快检查方法对福州地区长乐市、连江县、闽侯县等进行福寿螺广州管圆线虫感染检查，以福寿螺广州管圆线虫Ⅲ期幼虫感染率与阳性螺平均感染度(条/ 只) 的乘积作为当地的感染指数。疫源地等级划分标准，福寿螺感染度指数大于60 为Ⅳ级(超高度) ,30～59为Ⅲ级(高度) ,10～29为Ⅱ级(中度) ,小于9 感染度为Ⅰ级(轻度) ,0 为非疫源地。
讨 论
福寿螺又叫大瓶螺，是中腹足目瓶螺科，1979年由台湾养殖者当作美食首先从巴西引入台湾，1981年由广东引入大陆，福寿螺所含营养丰富，可以作为人的食物，然而福寿螺同时是广州管圆线虫的中间宿主[6]。
前几年在福建、温州、北京等地发生广州管圆线虫病暴发流行主要是生食或半生食福寿螺引起的。福寿螺原产于南美洲亚马逊河流域的一种大型淡水食用螺，系广州管圆线虫生活史一种中间宿主，在我国主要分布在福建、浙江、广东、广西、江西、海南、云南等地。研究福寿螺感染广州管圆线虫检测方法与检测注意事项，对于广州管圆线虫病流行病学调查和食品安全等有重要意义。研究采用2 种方法检查福寿螺感染广州管圆线虫情况，结果显示单纯检查福寿螺感染与否，以肺检法最快，只需从肺组织中看到幼虫结节即可。然而，在基础研究时需要分离出Ⅲ期幼虫以便用于后续的相关研究，直接从肺组织中分离Ⅲ期幼虫费时、费力，因螺肺组织1 个结节只含有1 条Ⅲ期幼虫，在解剖镜下从结节处分离幼虫较难。
组织匀浆沉渣镜检法，用不锈钢滤网80目清水冲洗，沉淀1小时，分离Ⅲ期幼虫，沉渣可用解剖镜检查。或用尼龙绢滤网40目直接沉渣静置2~3小时后可有幼虫大量逸出，收集Ⅲ期幼虫基本无杂质干净，幼虫活力强，适用于动物体内接种或某些基础研究，是目前分离幼虫最好方法。该方法我们在2005年度研究收集分离广州管圆线虫Ⅰ期Ⅲ期幼虫，在2005年度获得福建省职工优秀技术创新成果奖。
采用肺检法检查螺内广州管圆线虫第Ⅲ期幼虫的方法较适合于疫源地流行病学调查和分析判断和福寿螺感染广州管圆线虫Ⅲ期幼虫感染率及疫源地分级。
解剖镜使用不当，焦距调整不好Ⅲ期幼虫易漏检，一次镜检平皿中沉渣液体不能太多太浓，应适中能透明到平皿底中，镜检才不易漏检。
参考文献
1． 李友松, 林金祥, 许贤让,等. 福建省首例人体广州管圆线虫病病原检出报告[J ]. 中国人兽共患病杂志, 2001, 17 (2) : 1172封三.
2．李莉莎,周晓农,林金祥,等.福建省广州管圆线虫6 种新宿主的发现及疫源地的感染率周年变化[ J ]．中国人兽共患病学报，2006 ,22 (6) :533 -537.
3．李莉莎,张榕燕,林金祥,等．福建省鼠类感染广州管圆线虫调查〔J〕．中国人兽共患病杂志，2010，26（2）：186－188．
4．潘长旺,邢文鸾,梁韶晖,等.温州福寿螺体内首次发现广州管圆线虫幼虫[J]．中国寄生虫病防治杂志,1998 ,11 (1):78.
5．潘长旺,邢文鸾,梁韶晖,等.温州广州管圆线虫宿主的调查研究[J]．温州医学院报,1998 ,28 (1):8 - 10.
6．方彦炎,,李莉莎,张榕燕,等．广州管圆线虫实验室模型建立的研究〔Ｊ〕．海峡预防医学杂志，2012，18（4）：50－51．
【基金项目】 “十五”国家科技攻关计划资助项目( No.2003BA 712A09201)
【作者简介】 方彦炎 1956 , 男 大专，主要从事人体寄生虫病的防治与研究工作。E2mail：fyy50 @163. com
关于2013年度省科技奖评审结果的公示
你当前的位置：主页> 科技评审 >申报公示>
2013年福建医学科技奖专业组评审通过项目公示作者：XLH发布时间：2013-08-2718:41[2013]56福建省广州管圆线虫病的系列研究
主要完成单位：福建省疾病预防控制中心
中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所
主要完成人：李莉莎 杨发柱张榕燕 周晓农 陈宝建林陈鑫 张 仪吕 山 方彦炎李燕榕
