爱华网庄毅
摘要 目的：介绍从民间发掘出一种入药1500余年但湮没已300余年的重要药用菌槐耳，并将其研制成抗癌新药的情况。方法：据研究报告资料，综述有关槐耳的发现、鉴定与考证、生产工艺、理化、药理、毒理与临床试验等。结果与结论：槐耳菌质及其冲剂(颗粒)对中晚期原发性肝癌具有阻抑肿瘤生长、缓解症状、延长生命等功效，现已被批准为中药一类新药，正式投产。
关键词 发酵基质；固体发酵；菌质；清膏
1977年上海肿瘤医院曾报告，青岛一位原发性肝癌晚期患者，因长期用槐耳子实体泡开水喝，竟奇迹般痊愈。这引起笔者的注意，为此对槐耳进行了系统的调查与研究，终于研制成抗癌新药槐耳菌质(药材)与槐耳冲剂(药品)，现均已被卫生部批准为中药一类新药，投入生产。现将有关资料作一综合报道。
1 槐耳菌的开发及固体发酵生产
1.1 槐耳的分类地位
由患者提供的槐耳标本经鉴定学名为TrametesrobiniophilaMurr.，中名为槐栓菌［1］。按Ainsworth等1973年分类系统，属担子菌亚门Basidiomycotina，多孔菌科Polyporaceae，栓菌属［2］。
查现代有关文献虽提及槐耳，但大多未见注学名［3］，少数以为它是槐树上生长的黑木耳，学名为Auriculariaauricula(L.exHooR)Underwood［4］，二者的分类位置相距甚远，为澄清这个问题，笔者曾对槐耳进行了详细考证：槐耳始见于1500年前《肘后方》，历代本草均有记述，能“治风”、“破血”、“益力”［5］，但湮没于300余年前的清代，现已确证槐耳就是槐栓菌，终于澄清了中药史上的一项悬案［6］。经调研证实，槐耳是产地民间用以治疗癌症和炎症的一种药用真菌，生长在古老的中国槐(Sophorajaponica)上，近代因寄主稀少及群众偶有所得又多璧藏等，故已属珍稀难收购品种。
1.2 槐耳的菌种分离及其生物学特性
采取适用的槐耳子实体，进行菌种分离、纯化并复栽成功，获得人工培育的槐耳。
经研究表明，槐耳菌丝体生长的适宜营养为：碳源——麦芽糖，氮源——酵母粉，其营养基质是以玉米蕊为主所组成。菌丝体生长最低温5℃，最高温37℃，适温30℃。最适pH=5.5。又据它的生长情况和菌质的药效试验结果，确定了合理的基质成分配比及含水量等，为后继研究奠定基础。
1.3 固体发酵工程［7］
因槐耳的培育方法繁复、生长周期长、生物效应低、难供药用需要，因此必须探索其它生产工艺。
药用真菌除直接应用子实体外，国内外又常用液体发酵，我国还有独特的固体发酵工程。传统的固体发酵工程是，药用真菌在由农副产品组成的固体营养基质上生长，分解基质，取得营养，生长菌体，并产生各种次生代谢物质，使基质经发酵后成为菌质供药用。其特点是，菌体不能与发酵后的基质相分开［7］，槐耳菌曾采用液体发酵与固体发酵两种生产工艺，将产品分别提取成分，进行荷瘤动物体内抑瘤(S180)试验，前者抑瘤率为12%，后者＞30%，效果差异明显，故决定采用固体发酵。这须要先解决发酵质量的监控与终点判断等重要技术关键。
槐耳在0d～100d发酵过程中，每隔10d～15d取菌质样本一份提取成分进行化学成分分析，并进行动物体内抑瘤试验，结果见表1。
表1 槐耳菌不同发酵时间菌质成分的抑瘤率及其多糖、蛋白质含量测定结果
时间/d成分含量/mg*g-1抑瘤率/%
多糖蛋白质
088.2201.90
1516.0324.435
3012.4352.638
4512.7389.454
5511.2309.035
10010.5281.421
从表1显示，随着发酵时间的增加，基质转化为菌质，其多糖含量逐步下降，而蛋白质含量却渐上升，二者间存在消长关系，当达到一定发酵周期(约45d)，多糖与蛋白质都渐趋稳定，这时期从菌质所提取成分的抑瘤率明显最高，这时期也是槐耳菌从营养生长转向生殖生长的阶段。在药理试验中，又证实多糖蛋白是槐耳菌质的重要有效成分，可据此制订槐耳的发酵质量监控指标及判定菌质的发酵终点，它也是药品的重要质量标准。在研究了合理的菌质后处理工艺后，原有的药用菌固体发酵的生产工艺已趋完善，即用以生产槐耳菌质。
2 槐耳清膏与冲剂的制备
槐耳菌在营养基质上发酵可获槐耳菌质，菌质经热水等提取即得槐耳清膏(相对密度1.33以上)。加入适量糊精、糖粉等辅料，混合均匀后制成颗粒，烘干，呈棕黄色颗粒，气腥、味甘、微香，包装成每袋20g，即槐耳冲剂。
3 槐耳新药的基础研究
槐耳菌质及槐耳冲剂的新药研究是按照卫生部颁发的《新药审批办法》各项规定进行的。
槐耳菌质用热水提取清膏或进一步经乙醇沉淀得多糖，并还可精制成均质的多糖蛋白(PS-T)，用它们进行化学、药理等研究。清膏再进行毒理试验。
3.1 化学研究
槐耳菌质所提清膏含有多种有机成分，10余种矿质元素。动物试验证明，主要活性成分是多糖蛋白(PS-T)，为棕褐色粉末，没有明显熔点，280℃时变黑，易溶于热水，稍溶于低浓度乙醇，水溶液pH=5～6，无旋光性。经纸层析与气相层析、高效液相、聚丙酰胺凝胶电泳、紫外与红外光谱、核磁共振等分析，证明由6种单糖即L-岩藻糖；L-阿拉伯糖；D-木糖；D-甘露糖；D-半乳糖；D-葡萄糖(摩尔比为0.51∶1，51∶1，48∶1，39∶1∶3.24)组成的杂多糖结合18种氨基酸构成的蛋白质。见表2。
表2 槐耳多糖氨基酸分析结果
氨基酸含量/%氨基酸含量/%
天冬氨酸(Asp) 1.418 甲硫氨酸(Met)0.120
苏氨酸(Thr)0.731 异亮氨酸(He)0.398
丝氨酸(Ser)0.626 亮氨酸(Leu)0.569
谷氨酸(Glu)3.525 酪氨酸(Tyr)0.249
脯氨酸(Pro)0.740 苯丙氨酸(Phe)0.347
甘氨酸(Gly)1.073 赖氨酸(Lys)0.689
丙氨酸(Ala)0.6624 组氨酸(His)0.267
胱氨酸(Cys)20.160 色氨酸(Try)0.097
缬氨酸(Vai)0.652 精胺酸(Arg)0.645
总量/%12.930
槐耳多糖含量为41.53%，氨基酸总量12.93%，水分8.72%，相对分子量(w)为30000，其多糖分子键糖苷构型为β型［8］。初步分析菌质与子实体成分较一致。
3.2 药理试验
经全军肿瘤研究中心，中国科学院上海药物研究所等进行荷瘤动物体内抑瘤试验，证实在一定剂量范围内槐耳清膏灌胃对小鼠肉瘤S180抑瘤率为25%～46%，腹水型S180生命延长率为38%。多糖腹腔给药抑瘤率为37.1%～48%，生命延长率为50%。均质多糖蛋白(PS-T)灌胃抑瘤率为38%、腹腔给药为38%～40.1%，P＜0.05～P＜0.01。说明清膏、多糖及PS-T对小鼠肉瘤S180，腹水型S180有很明显抑瘤作用并对荷瘤动物有显著延长生命的作用。免疫试验显示，槐耳对巨噬细胞吞噬功能有非常显著的促进作用，能增强溶菌酶活性，对脐血EaRFC及GVHR有增进影响，对α，γ干扰素诱生，α干扰素促NK活性有协同作用，可提高特异性抗体产生，促进小鼠脾细胞DNA合成，说明它可明显促进机体免疫功能［9］。它还能提高血清中血红蛋白含量，提示对红血球生成有一定作用。一般药理试验结果，多糖静脉给药对犬血压、心电图、心率均无明显影响，对麻醉后呼吸频率也无明显影响，对家兔呼吸系统、大鼠神经系统的实验也未见异常，说明槐耳对心血管、神经和呼吸系统无明显影响。
3.3 毒理研究
动物急性毒性试验表明，清膏对小鼠的最大给药剂量相当于人临床剂量的126.6倍；大鼠按95倍灌胃，均未能测出LD50。长期毒性试验，大鼠按临床剂量的95倍灌胃3个月，家犬小剂量组为临床等效剂量，大剂量组为24.7倍，连续灌胃6个月，动物生长正常，经血象、生化等检查分析，各组动物都未发生异常，也未发现由药物引起的病理性改变。特殊毒理如诱变试验及细胞遗传毒性-微核及染色体畸变试验等均为阴性反应。
4 临床试验
4.1 Ⅰ期临床试验
槐耳冲剂的临床剂量成人每天服用3包，每包20g含干清膏2.64g。正常人服药1个月，服药前后进行肝肾功能、血常规和心电图等检测均无影响，亦未见对骨髓功能有抑制作用，证实它是安全的。
4.2 Ⅱ期临床试验
用槐耳冲剂治疗中晚期原发性肝癌128例，按1978年全国肿瘤药物会议制订的疗效评定标准，其中完全缓解5例，部分缓解10例，稳定69例，进展46例，有效率11.9%，稳定率64.06%，疗后生存期1～6个月78例，6个月以上到1年32例，其中1年者11例，1年以上至2年者12例，2年以上者7例，一年生存率30%(30/100)，随访结束时最长生存期逾5年。试验表明，槐耳冲剂具抗癌作用并有缓解症状、延长生命等功效，且安全无毒副作用。同时又与5-FU对照组分别治疗Ⅱ期原发性肝癌各32例，均治疗1个月以上，二组临床效果相仿，但疗后一年生存率槐耳组为25%，对照组仅4%，有显著性差异。
4.3 Ⅲ期临床试验
由6所医院共完成405例，其中50例设甲基斑蟊胺对照组。病情已达Ⅲ期的患者1个月为一疗程，观察期3个月以上，Ⅱ期患者3个月为一疗程观察一年以上，疗程间无明显界限可连续服用，原发性肝癌诊断和疗效标准据1993年卫生部《关于中药新药临床研究指导原则》所订标准。病例按中医、西医分期分型。西医分型以硬化型381例(94.1%)为主，Ⅱ期244例(52.84%)，Ⅲ期174例(42.96%)。中医分型共210例，脾虚湿困型50例(23.3%)，肝肾阴虚型60例(28.6%)，气滞血淤型87例(41.4%)，肝胆湿热型13例(6.2%)。试验结果证明，槐耳冲剂能显著减轻肝区疼痛，消除腹胀与乏力，改善黄疸，消退腹水，增加体重，卡氏评分增加，使AFP阳性患者的AFP含量下降，症状好转，持续中位时间4个月。405例中，部分缓解11例，稳定266例，稳定率68.4%。寿命表法疗后生存期半年生存率67.9%，一年生存率44.7%。未见明显毒副作用，疗效与疗程有正相关的关系。按以上中医四种分型，其稳定率分别为64.00%，71.66%，80.46%，23.08%，提示以气滞血淤型及肝肾阴虚型疗效较好，脾虚湿困型次之，肝胆湿热型较差，似与槐耳的治风、破血有关。与甲基斑蟊胺对照组各治疗50例，比较各项指标，槐耳冲剂均明显优于对照组P＜0.05或＜0.01。
5 槐耳冲剂治疗慢性乙型肝炎
槐耳产区民间也曾用它治疗肝炎，经试验，清膏对小鼠血清干扰素诱生作用非常明显，对鸭肝炎病毒DHBV在用药后使鸭血清HBV-DNA水平显著下降。槐耳冲剂临床试用于HBeAg阳性慢乙肝患者60例，HBeAg转阴率达33%，而对照组用一般护肝药维生素C等治疗40例，转阴率为5%。说明槐耳对慢乙肝有较好疗效，提示它有可能阻断乙肝患者的癌变，值得扩大探索它的其它临床适应证。
(南京210029南京中医药大学药用菌与中药生物技术研究所)
参考文献
1 邓叔群.中国的真菌.北京：科学出版社，1963：515.
2 AinsworthGC,SusmanAS.Thefungianadcancedtreatise1973.
3 应建淅，卯晓岚，马启明，等.中国药用真菌图鉴.北京：科学出版社，1987：1.
4 江苏新医学院.中药大辞典.上海：上海人民出版社，1997：2433.
5 李时珍.槐耳.本草纲目下册(菜部)二十八卷.北京：人民卫生出版社，1982：1712.
6 庄毅.槐耳的鉴定与考证.中国食用菌，1993，13(6)：22.
7 庄毅.药用真菌的固体发酵.中国药学杂志，1991，26(2)：80.
8 郭跃伟，程培元，陈玉俊，等.槐耳菌丝体多糖的分离和分析.中国生化药物杂志，1992，1：56.
9 陈慎宝，丁如宁，等.槐耳菌质成分对小鼠免疫功能的影响.食用菌学报，1995，2(1)：21.
(收稿：1996-09-13)
