爱华网化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则
（第二稿）
二OO 四年三月十九日
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目录
一、概述………………………………………………………4
二、方法验证的一般原则……………………………………5
三、方法验证涉及到的三个要素……………………… 5
1、需要验证的检测项目…………………………………… 5
2、分析方法………………………………………………… 6
3、验证内容………………………………………………… 7
四、方法验证的具体内容……………………………………7
（一） 专属性……………………………………………… 7
1、鉴别反应………………………………………………… 7
2、杂质检查………………………………………………… 7
3、含量测定………………………………………………… 8
（二） 线性……………………………………………………8
（三） 范围……………………………………………………9
1、含量测定………………………………………………… 9
2、制剂含量均匀度………………………………………… 9
3、溶出度或释放度………………………………………… 9
4、杂质…………………………………………………… 10
（四） 准确度……………………………………………… 10
1、含量测定………………………………………………… 10
2、杂质定量试验…………………………………………… 10
2
（五） 精密度…………………………………………………11
1、重复性…………………………………………………… 11
2、中间精密度……………………………………………… 12
3、重现性…………………………………………………… 12
（六） 检测限…………………………………………………12
1、直观法……………………………………………………12
2、信噪比法………………………………………………… 12
（七） 定量限…………………………………………………13
1、直观法……………………………………………………13
2、信噪比法………………………………………………… 13
（八） 耐用性…………………………………………………14
（九）系统适用性试验………………………………………14
五、方法再验证………………………………………………15
六、方法验证的评价………………………………………16
1、有关方法验证评价的一般考虑………………………… 16
2、方法验证的整体性和系统性…………………………… 16
七、参考文献……………………………………………… 17
八、起草说明……………………………………………… 18
九、著者…………………………………………………… 20
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质量控制分析方法验证的技术指导原则
一、概述
保证药品安全、有效、质量可控是药品研发和评价应遵循的基
本原则，其中，对药品进行质量控制是保证药品安全有效的基础和前
提。为达到控制质量的目的，需要多角度、多层面来控制产品质量，
也就是说要对药物进行多个项目测试，来全面考察产品质量。一般地，
每一测试项目可选用不同的分析方法，为使测试结果准确、可靠，必
须对所采用的分析方法的科学性、准确性和可行性进行验证，以充分
表明分析方法符合测试项目的目的和要求，这就是通常所说的对方法
进行验证。
方法验证的目的是判断采用的分析方法是否科学、合理，是否能
有效控制产品的内在质量。从本质上讲，方法验证就是根据检测项目
的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所
采用的分析方法是否满足检测项目的要求。
方法验证在分析方法建立过程中具有重要的作用，并成为质量研
究和质量控制的组成部分。只有经过验证的分析方法才能用于控制产
品质量，因此方法验证是制订质量标准的基础。方法验证是药物研究
过程中的重要内容。
本指导原则重点探讨方法验证的本质，将分析方法验证的要求
与所要达到的目的结合起来进行系统和规律性的阐述，重点阐述如何
科学合理地进行论证方案的设计。
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本指导原则主要包括方法验证的一般原则、方法验证涉及的三
个要素、方法验证的具体内容、对方法验证的评价等内容。
本原则与其他相关技术指导原则一起构成较完整的质量控制指
导原则。
随着我国新药研发水平的不断提高，对方法验证的认识也会不
断深入，本指导原则将会逐步完善和修订。
由于生物制品和中药特殊性，本原则主要适用于化学药品。
二、方法验证的一般原则
原则上每个检测项目采用的分析方法，均需要进行方法验证。
方法验证的内容应根据检测项目的要求，结合所采用分析方法的
特点确定。
同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。例如，
采用高效液相色谱法用于制剂的鉴别和杂质定量试验应进行不同的
方法验证时，前者重点要求验证专属性，而后者重点要求验证准确性、
专属性、定量限。
三、方法验证涉及的三个要素
方法验证涉及到需要验证的检测项目、分析方法和验证内容三个
要素，简述如下。
1、需要验证的检测项目
检测项目是为控制产品质量，保证安全有效而设定的测试项目。
根据检测项目的设定目的和验证内容的不同要求，本指导原则将需验
证的检测项目分为鉴别、杂质检查（限度试验、定量试验）、定量测
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定（含量测定、溶出度、释放度等）、其他特定检测项目等四类。
鉴别的目的在于判定被分析物是目标化合物，而非其它物质，用
于鉴别的分析方法要求具有较强的专属性。
杂质检查主要用于控制主成分以外的杂质，如有机杂质、无机杂
质等。杂质检查可分为限度试验和定量试验两种情况。限度试验通常
指氯化物、硫酸盐、重金属、砷盐、炽灼残渣、干燥失重、水分等检
查。定量试验一般包括有关物质、有机溶剂残留量等检查。用于限度
试验的分析方法验证侧重检测限和专属性。用于定量试验的分析方法
验证强调定量的准确性、灵敏度和专属性。
定量测定包括含量测定、制剂的溶出度测定等，由于此类项目对
准确性要求较高，故所采用的分析方法要求具有一定的准确性、专属
性和范围。
其他特定检测项目包括粒径分布、旋光度、分子量分布等，由于
这些检测项目的要求与鉴别、杂质检查、定量测定等有所不同，对于
这些项目的分析方法验证应有不同的要求。
2、分析方法
本指导原则所指分析方法是为完成上述各检测项目而设定和建
立的测试方法，一般包括分析方法原理、仪器及仪器参数、试剂、系
统适用性试验、供试品制备、对照品溶液制备、测定、计算及测试结
果的报告等。
测试方法可采用化学分析方法和仪器分析方法。这些方法各有特
点，同一测试方法可用于不同的检测项目，但验证内容可不相同。
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3、验证内容
验证内容包括验证方法的专属性、线性、范围、准确度、精密度、
检测限、定量限、耐用性和系统适用性等。
四、方法验证的具体内容
对具体的验证内容分别说明如下。
（一）专属性
专属性系指在其他成分（如杂质、降解物、辅料等）可能存在
下，采用的分析方法能够准确测定被分析物质的特性的能力。
通常，鉴别、杂质检查、含量测定方法中均应考察其专属性。
如采用的方法不够专属，应采用多个方法予以补充。
1、鉴别反应
鉴别试验应确证被分析物符合其特征。专属性试验要求证明能
与可能共存的物质或结构相似化合物区分，需确证含被分析物的样品
呈正反应（可与已知对照物比较），而不含被测成分的样品呈负反应，
以及结构相似或组分中的有关化合物，也应呈负反应。
2、杂质检查
作为纯度检查，所采用的分析方法应确保可检出被分析物中杂质
的含量，如有关物质、重金属、残留溶剂等。因此杂质检查要求分析
方法有一定的专属性。
在杂质可获得的情况下，可向供试品中加入一定量的杂质，证
明杂质与共存物质能得到分离和检出，并具适当的准确度与精密度。
在杂质或降解产物不能获得的情况下，专属性可通过与另一种
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已证明是合适的、分离或检测原理不同、或具较强分辨能力的方法进
行结果比较来确定。或将供试品用强光照射，高温，高湿，酸、碱水
解及氧化的方法进行破坏（制剂应考虑辅料的影响），比较破坏前后
检出的杂质个数和量。必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进
行色谱峰纯度检查。
3、含量测定
含量测定目的是得到样品中被分析物的含量或效价的准确结果。
在杂质可获得的情况下，对于主成分含量测定可在供试品中加入
杂质或辅料，考察测定结果是否受干扰，并与未加杂质和辅料的试样
比较测定结果。
在杂质或降解产物不能获得的情况下，可采用另一个经验证了
的或药典方法进行比较，比对两种方法测定的结果。也可采用破坏性
试验（强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化），得到含有杂质
或降解产物的试样，用两种方法进行含量测定比较测定结果。必要时
进行色谱峰纯度检查，证明含量测定成分的色谱峰中不包含其他成
分。
（二）线性
线性系指在设计的范围内，检测结果与试样中被分析物的浓度
（量）直接呈线性比例关系的能力。
线性是定量测定的基础，涉及定量测定的项目，如杂质定量试
验和含量测定均需要验证线性。
应在设计的范围内测定线性关系。可用一贮备液经精密稀释，
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或分别精密称样，制备一系列被测物质浓度系列进行测定，至少制备
5 个浓度。以测得的响应信号作为被测物浓度的函数作图，观察是否
呈线性，用最小二乘法进行线性回归。
必要时，响应信号可经数学转换，再进行线性回归计算，并说
明依据。
（三）范围
范围系指能够达到一定的准确度、精密度和线性，测试方法适
用的试样中被分析物的高低限浓度或量的区间。
范围通常用与分析方法的测试结果相同的单位（如百分浓度）
表达。涉及到定量测定的检测项目均需要对范围进行验证，如含量测
定、含量均匀度、溶出度或释放度、杂质定量试验等。
范围应根据剂型和（或）检测项目的要求确定。
1、含量测定
范围应为测试浓度的80％～100％或更宽。
2、制剂含量均匀度
范围应为测试浓度的70％～130％。根据剂型特点，如气雾剂、
喷雾剂，必要时，范围可适当放宽。
3、溶出度或释放度
对于溶出度，范围应为限度的±20％；如规定限度范围，则应
为下限的-20％至上限的+20％。
对于释放度，如规定限度范围，从1 小时后为20％至24 小时后
为90％，则验证范围应为0～110％。
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4、杂质
杂质测定时，范围应根据初步实测，拟订出规定限度的±20％。
如果含量测定与杂质检查同时测定，用面积归一化法，则线性范围应
为杂质规定限度的-20％至含量限度（或上限）的+20％。
（四）准确度
准确度系指用该方法测定的结果与真实值或认可的参考值之间
接近的程度。有时也称真实度。一般以回收率（％）表示。
一定的准确度为定量测定的必要条件，因此涉及到定量测定的
检测项目均需要验证准确度，如含量测定、杂质定量试验等。
准确度应在规定的范围内建立。该指标的验证一般以回收率试
验来进行，试验设计需考虑在规定范围内，制备3 个不同浓度的样品，
各测定3 次，即测定9 次，报告已知加入量的回收率（％）或测定结
果平均值与真实值之差及其可信限。
1、含量测定
原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得
结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。
制剂可用含已知量被测物的各组分混合物进行测定。如不能得
到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，必要
时，与另一个已建立准确度的方法比较结果。
2、杂质定量试验
杂质的定量试验可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测
定。如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的
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方法进行比较，如药典标准方法或经过验证的方法。
如不能测得杂质或降解产物的相对响应因子，可在线测定杂质
或降解产物的相关数据，如采用二极管阵列检测器测定紫外光谱，当
杂质的光谱与主成分的光谱相似，则可采用原料药的响应因子近似计
算杂质含量（自身对照法）。并应明确单个杂质和杂质总量相当于主
成分的重量比（％）或是面积比（％）。
（五）精密度
精密度系指在规定的测试条件下，同一均质样品，经多次取样
进行一系列检测所得结果之间的接近程度（离散程度）。精密度一般
用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。
该指标目的是考察分析方法在不同的时间、操作人员、试验室
下，所得结果的重现性和重复性。涉及定量测定的项目，如含量测定
和杂质定量试验应考察方法的精密度。
精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。用标准偏
差或相对标准偏差表示时，取样测定次数应有统计学意义，至少用6
次结果进行评价。
精密度可以从三个层次考察：重复性、中间精密度、重现性。
1、重复性
重复性系指在同样的操作条件下，在较短时间间隔内，由一个
分析人员测定所得结果的精密度。
重复性测定可在规定范围内，至少用9 次测定结果进行评价，
如制备3 个不同浓度的样品，各测定3 次，或采用同一批样品（把被
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测物浓度当作100％），用至少测定6 次的结果进行评价。
2、中间精密度
中间精密度系指在同一试验室，由于试验室内部条件改变，如
时间、分析人员、仪器设备、测定结果的精密度。
验证设计方案中的变动因素一般为日期、分析人员、设备。
3、重现性
指不同实验室之间不同分析人员测定结果的精密度。
当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。
（六）检测限
检测限系指试样中的被分析物能够被检测到的最低量，但不一
定要准确定量。
该验证指标的意义在于考察方法是否具备灵敏的检测能力。因
此对杂质限度试验，需证明方法具有足够低的检测限，以保证需要控
制的杂质被测出。
1、直观法
直观评价可以用于非仪器分析方法，也可用于仪器分析方法。
检测限的测定是通过对一系列已知浓度被分析物的样品进行分
析，并以能准确（或被可靠）地检测被测物的最小量或最低浓度来建
立。
2、信噪比法
用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度试样测出的
信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低
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浓度或量。一般以信噪比为3：1 或2：1 时相应的浓度或注入仪器的
量确定检测限。
其他方法有基于工作曲线的斜率和响应的标准偏差进行计算的
方法等。
无论用何种方法，均应用一定数量的样品，其浓度为近于或等
于检测限，进行分析，以可靠地测定检测限。
（七）定量限
定量限系指试样中的被分析物能够被定量测定的最低量，其测
定结果应具有一定的准确度和精密度。
该指标体现了分析方法是否具备灵敏的定量检测能力。杂质定
量检查，需考察方法的定量限，以保证含量很少的杂质能够被准确测
出。
常用信噪比法确定定量限。一般以信噪比为10：1 时相应的浓
度或注入仪器的量进行确定。
1、直观法
直观评价可以用于非仪器分析方法，也可用于仪器分析方法。
定量限一般通过对一系列含有已知浓度被测物的样品进行分
析，在准确度和精密度都符合要求的情况下，来确定被测物能被定量
的最小量。
2、信噪比法
用于能显示基线噪音的分析方法，即把已知低浓度试样测出的
信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低
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浓度或量。一般可接受的信噪比是10：1。
其他方法有基于工作曲线的斜率和响应的标准偏差进行计算的
方法等。
无论用何种方法，均应用一定数量的样品，其浓度为近于或等
于定量限，进行分析，以可靠地测定定量限。
（八）耐用性
耐用性系指测定条件发生细小变动时，测定结果保持不受影响
的承受程度。
耐用性主要考察方法本身对于可变试验因素的抗干扰能力。开
始研究分析方法时，就应考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则
建议在方法中予以写明。
典型的变动因素包括：液相色谱法中流动相的组成和pH 值，不
同厂牌或不同批号的同类型色谱柱，柱温、流速等。气相色谱法中载
气及流速、不同厂牌或批号的色谱柱、固定相，担体、柱温，进样口
和检测器温度等。
经试验，应说明小的变动能否通过设计的系统适用性试验，以
确保方法有效。
（九）系统适用性试验
对一些仪器测试方法，在进行方法验证时，有必要将分析设备、
电子仪器与实验操作、被测试样品等一起当作完整的系统进行评估。
系统适用性便是对整个系统进行评估的指标。系统适用性试验参数的
设置需根据被验证方法类型而定。
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色谱方法对分析设备、电子仪器的依赖程度较高，因此所有色
谱方法均应进行该指标验证，并将系统适用性作为分析方法的组成部
分。具体验证参数和方法参考中国药典有关规定。
五、方法再验证
在某些情况下，如原料药合成工艺改变、制剂处方改变、分析
方法发生改变等，均有必要对分析方法再次进行全面或部分指标的验
证，以保证分析方法可靠，这一过程称为方法再验证。
再验证原则：根据改变的程度进行相应的再验证。
当原料药合成工艺发生改变时，可能引入新的杂质，杂质检查
方法和含量测定方法的专属性就需要再进行验证，以证明有关物质检
查方法能够检测新引入的杂质，含量测定方法中新引入的杂质对主成
份的测定无干扰。
当制剂的处方组成改变、辅料变更时，可能会影响鉴别的专属
性、溶出度和含量测定的准确度，因此需要进行辅料对鉴别、对含量
测定影响的方法再验证；当原料药产地来源发生变更时，可能会影响
杂质检查的专属性和含量测定的准确度，因此需要对杂质检查方法和
含量测定进行再验证。
当质量标准中某一项目分析方法发生改变时，如采用高效液相
色谱法测定含量时，检测波长发生改变，则需要重新提供检测限、专
属性、准确度、精密度、线性等相应的方法学研究资料，证明修订后
分析方法的合理性、可行性。
同样，已有国家标准的药品质量研究中，基于申报的原料药合
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成工艺、或制剂处方中的辅料等一般无法保证与已上市产品的一致
性，需对质量标准中部分项目进行方法的再验证。
方法再验证是对分析方法的完善过程，应根据实际改变情况进
行再验证，从而保证所采用的分析方法能够控制产品的内在质量。
六、对方法验证的评价
对于方法验证，有以下几个方面值得关注。
1、有关方法验证评价的一般考虑
总体上，方法验证应围绕验证目的和一般原则来进行，方法验
证内容的选择和试验设计方案应合理、充分，验证过程应规范严谨。
并非每个分析方法都要进行所有内容的验证。但同时也要考虑
验证指标应充分，足以证明采用的分析方法的合理性。如杂质的限度
试验分析方法一般需要验证专属性和检测限，而对于精密度、线性、
定量限等涉及定量测定的项目，则一般不需要进行验证。
2、方法验证的整体性和系统性
方法验证内容之间相互关联，是一个整体。因此不论从研发角
度还是评价角度，方法验证均注重整体性和系统性。
例如，对于鉴别项目所需要的专属性，一般一种分析方法不太
可能完全鉴别被分析物，此时采用两种或两种以上分析方法可加强鉴
别项目的整体专属性。
在方法验证指标之间也存在较多的关联性，可以相互补充。如
原料药含量测定采用容量滴定法时，由于方法本身原因，专属性略差，
但假如在杂质检测时采用了专属性较强的色谱法，则一般认为整个检
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测方法也具有较强的专属性。
总之，由于实际情况较复杂，在方法验证过程中，具体情况应
具体分析，不提倡教条地去进行方法验证。此外，越来越多的新方法
不断被用于质量控制中，如小角度激光散射法控制粒径，对于这些方
法如何进行验证更需要具体情况具体分析，而不能照搬本指导原则。
七、参考文献
1. FDA.Guidance for Industry:analytical procedures and methods
validation,chemistry,manufacturing,and controls documentation(Draft),
2000.8。
2. ICH Q2A.Test on Validation of Analytical Procedures
3. ICH Q2B.Validation of Analytical Procedures:Methodology
4.中国药典2000 年版二部附录.药品质量标准分析方法验证
八、起草说明
（一） 背景资料
关于方法验证，美国、欧盟等药政管理当局出台了相关指导性
文件，对方法验证的具体内容进行了阐述和规定[1-3]，中国药典2000
年版二部附录亦收载了药品质量标准分析方法验证内容[4]。为药品研
发和注册申请提供技术指导。
但目前我国药物研究中，在质量研究部分，方法学验证方面还
存在较多的问题，主要表现在：方法验证设计不科学、验证不充分、
试验过程不规范、验证数据不合理、忽视方法再验证等。
产生上述问题的原因之一是，已有的国内外指导原则主要告知
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研发者如何做，却较少阐述深层次的原因，研发者在药物研究时往往
不知技术要求背后深层次的原因。
针对这种情况，本指导原则重点探讨方法验证的本质，将分析
方法验证的要求与所要达到的目的结合起来进行系统和规律性的阐
述，重点阐述如何科学合理地进行论证方案的设计，希望能对研发提
供技术参考。
（二）本指导原则内容设置的考虑
本指导原则包括方法验证的一般原则、方法验证涉及的三个要
素、方法验证的具体内容、对方法验证的评价等内容。内容编排上，
先阐述方法验证的一般规律和基本要素，然后对方法验证的具体内容
进行阐述，以对一般规律有更深刻的理解。对方法验证的评价体现了
药物研究的整体性和系统性，符合药物研究规律，希望从评价角度给
研发者以有益的启示。
（三）方法验证的一般原则
该部分内容重点阐述对方法验证的一般认识和原则要求。强调验
证内容应根据检测项目的要求，同时考虑所采用分析方法的特点来进
行。
根据验证内容的不同要求，本文将检测项目分成鉴别、杂质检
查、定量测定、其他特定检测项目等四类，简要叙述了各自特点及对
方法验证的要求,其中，杂质检查分为限度试验和定量试验两种情况，
为澄清有关误解，正文部分又进行了进一步解释和说明，限度试验主
要指一般杂质检查，而定量试验主要包括有关物质检查和有机溶剂残
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留量检查等。本文所采取的分类方式是参考了FDA有关指导原则[1]的
分类，经重庆会议讨论后确定。
（四）方法验证的具体内容
此部分内容以验证内容为主线，明确各验证内容的含义，根据检
测项目的不同类型和要求，具体阐述方法验证的试验设计思路。此部
分主要内容参考了国内外有关文献[1-4]，并结合了实际情况加以制订。
（五）关于方法再验证
在实际审评工作中，该方面遇到了较多的问题，因此单列一节，
希望引起研发企业的重视。原料药的合成路线改变、制剂处方改变；
已有国家标准产品如何进行方法验证的问题；检测方法发生改变时；
本节以上述情况举例说明如何进行方法再验证
（六）对方法验证的评价
此部分内容主要阐述了评价方法验证的基本观点，注重方法验
证的整体性和综合性。也希望通过该部分撰写启发研发企业系统地进
行方法验证。
（七）与其他指导原则的关联性问题
本指导原则与质量标准建立、有机溶剂研究、杂质研究等相关
指导原则具有相关性，不宜孤立地看待本指导原则。
九、著者
化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则课题研究组
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